现今,食品安全已受到人们密切关注,国家更投入了大量的精力管理。其中,农药残留带来的食品安全问题屡见不鲜,所以,农药残留的检验检测十分重要。仅靠传统的化学分析方法不足以满足巨大的农产品市场,建立相应快速且灵敏度高的检测方法并用于农产品市场实际样本的初步筛选有巨大价值。本课题旨在建立检测蔬菜与水果中吡虫啉、啶虫脒、克百威以及涕灭威四种常见烟碱类及氨基甲酸酯类农药的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA)和胶体金试纸条分析方法。由于四种农药都属于小分子,自身无免疫原性且无可与载体蛋白偶联的活性基团,本课题根据四种农药的化学结构式设计并合成相对应的半抗原,使其带有羧基或氨基等可与载体蛋白偶联的活性基团。将半抗原通过碳二亚胺法(EDC)和戊二醛法(GA)与匙孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)及鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,得到不同条件的免疫原与包被原。采用常规免疫法和快速免疫法对BALB/c小鼠进行免疫,采用ic-ELISA检测小鼠血清以筛选出血清效价高且对目标药物抑制好的小鼠,取小鼠的脾脏与SP2/0瘤细胞进行细胞融合,通过ic-ELISA检测细胞上清,并采用有限稀释法对特异性好、灵敏度高的杂交瘤细胞进行亚克隆,得到单克隆杂交瘤细胞株扩大培养,制备腹水并纯化以获得单克隆抗体:吡虫啉3F2、啶虫脒1B3、克百威3H2和涕灭威4D10,亲和常数分别为2.04×109、9.22×108、4.32×108、1.96×108 L/mol。优化标准品稀释液的pH、离子强度(NaCl含量)和乙腈含量,测得相应单克隆抗体对吡虫啉、啶虫脒、克百威以及涕灭威的半数抑制浓度(IC50)分别为0.274、0.396、0.284、18.505 ng/m L,线性范围(IC20~IC80)分别是0.072~1.037、0.096~1.629、0.078~1.033、4.602~74.411 ng/mL,其中针对啶虫脒的单克隆抗体还对其同类农药噻虫啉有很高的交叉反应,对噻虫啉的IC50为0.093 ng/mL,线性范围0.036~0.241 ng/mL,可实现同时检测啶虫脒和噻虫啉的残留。其他三种相应抗体对类似药物的交叉率均小于1%,特异性强。基于所得抗体建立相应的ic-ELISA检测方法,对市场常见的实际果蔬样品(黄瓜和苹果)分别进行吡虫啉、啶虫脒、噻虫啉、克百威及涕灭威的添加回收实验,测得各药物的回收率均为80%~120%,具有可行性。同时,还建立了胶体金试纸条检测方法,直接将黄瓜和苹果榨汁检测,检测时黄瓜汁不稀释,苹果汁用1 M NaOH调节pH至中性后的稀释三倍,最终对于黄瓜和苹果中吡虫啉、啶虫脒、噻虫啉、克百威、涕灭威的消线检测限分别为:10 ng/g和20 ng/g;5 ng/g和10 ng/g;2.5 ng/g和5 ng/g;5 ng/g和10 ng/g;100 ng/g和200 ng/g,满足市场需求。此两种方法,可用于农场品市场中对吡虫啉、啶虫脒、噻虫啉、克百威以及涕灭威残留的初步筛检,尤其是胶体金试纸条的使用更加简便、快速。