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背景与目的:闭塞性细支气管炎/闭塞性细支气管炎综合征（BO/BOS）是慢性移植物抗宿主病（c GVHD）肺部最严重的并发症,其特征是由于过度炎症和纤维化引起特征性的终末和呼吸性细支气管狭窄、闭塞。肺肌成纤维细胞（myofibroblast,MFB）有望成为治疗纤维化的新靶点。间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）因抑制成纤维细胞（fibroblast,FB）向MFB转化而被广泛尝试于纤维化疾病的治疗,但MSC对于肺纤维化核心细胞MFB的具体作用尚不清楚,而且MSC治疗纤维化疾病的临床疗效不稳定、易反复;吡非尼酮（pirfenidone,PFD）是一种新型抗纤维化的吡啶酮小分子化合物,具有抗氧化、抗炎、抗纤维化的作用,研究证实PFD可抑制FB向MFB转化,但临床应用PFD,只能延缓疾病进展和部分改善症状,不能逆转已形成的纤维化病灶,也不能明显改善预后。青蒿琥酯（artesunate,ART）抗纤维化作用也被不断地揭示,我们团队前期工作也首次证实了ART通过线粒体凋亡途径诱导MFB凋亡,但即使在安全剂量范围内ART毒性也较大。探索新的抗纤维化治疗策略是当前迫切的任务。MSC对MFB的具体作用目前尚不清楚,青蒿琥酯与PFD抗纤维化作用那个更优?化学药物联合MSC是否可以提高抗纤维化作用,既克服MSC疗效不稳定、又减少化学药物的不良反应?因此,本研究将进一步了解人脐带间充质干细胞对肺肌成纤维细胞的具体作用;比较ART与PFD对MFB细胞的作用;探索化学药物（ART或PFD）联合人脐带间充质干细胞对肺肌成纤维细胞增殖、凋亡、细胞外基质合成功能的影响;为BO/BOS的治疗提供了新的理论和实验基础。方法:1.取约10cm长的新生儿脐带,经Ⅱ型胶原酶消化贴壁法培养脐带华通氏胶来源的间充质干细胞,对第3代间充质干细胞进行形态、表面标志物测定及向成骨、成脂分化能力鉴定。2.体外在人肺FB（MRC-5）培养体系中加入TGF-β（10ng/ml）,培养48h后,根据α-SMA的表达情况确定人肺MFB是否构建成功。3.体外MSCs与MFB transwell共培养24后,研究MSCs对MFB的作用:（1）CCK8检测MSCs处理后MFB（MSC-de MFB）的增殖情况;（2）台盼蓝染色检测MSC-de MFB的活性变化;（3）流式检测MSC-de MFB的凋亡情况;（4）q PCR、WB检测MSC-de MFB核心蛋白α-SMA及细胞外基质的m RNA、蛋白表达情况;（5）转录组分析;（6）光学显微镜下观察MSC-de MFB细胞形态及密度。4.体外ART或PFD与MFB共培养24h后,研究PFD对MFB的作用:（1）CCK8检测MFB细胞活性;（2）光学显微镜下观察细胞形态及密度;（3）q PCR、WB检测α-SMA及细胞外基质的m RNA、蛋白表达情况。5.体外MSCs和（或）ART与MFB transwell共培养24后,研究ART联合MSCs对MFB的作用:（1）流式检测MSC-de MFB的凋亡情况;（2）CCK8检测MSC-de MFB细胞活性（3）q PCR、WB检测MFB核心蛋白α-SMA及细胞外基质的m RNA、蛋白表达情况。结果:1.经胶原酶消化贴壁法可成功分离培养间充质干细胞,P3代细胞呈长梭形,形态单一;表面标志物CD90、CD105、CD73高表达,CD45、CD34、HLA-DR低表达;可向成骨及成脂分化。2.人肺FB细胞系经TGF-β（10ng/ml）诱导48h后,可成功构建肺MFB细胞。3.h UC-MSCs与MFB共培养24h后,细胞（MSC-de MFB）呈增殖状态,CCK8较对照组增加（1.87±0.05 vs 1.53±0.04,P＜0.01）;α-SMA与COL1A1、COL3A1、Fibronectin的m RNA（P＜0.01）明显降低,接近FB（MRC-5）初始水平;WB显示α-SMA、COL1A1、Fibronectin蛋白表达水平也明显降低（P＜0.01）。当重新加入TGF-β后,MSC-de MFB恢复MFB特征（α-SMA、COL1A1、Fibronectin的m RNA和蛋白表达水平均升高）。4.PFD与MFB共培养24h后,可抑制细胞增殖,CCK8较对照组降低（1.22±0.01 vs2.03±0.04,P＜0.01）,α-SMA、COL1A1、Fibronectin的m RNA和蛋白水平均降低（P＜0.01）。相比于PFD-MFB组,ART-MFB组对α-SMA（P＜0.05）及细胞外基质的抑制作用（P＜0.01）进一步降低。5.当青蒿琥酯加入MSC-de MFB后,可诱导MSC-de MFB凋亡（8.45±0.27%vs 0.88±0.03%,P＜0.01）;α-SMA与COL1A1、COL3A1、Fibronectin的m RNA明显降低（P＜0.01）;WB显示α-SMA与COL1A1表达降低（P＜0.01）。结论:体外MSC分泌物促进MFB增殖、可诱导MFB可逆性去分化（MSC-de MFB）、并抑制其α-SMA及纤维化相关细胞外基质基因表达;青蒿琥酯对肺MFB的抑制作用优于吡非尼酮;青蒿琥酯诱导MSC-de MFB细胞凋亡,与MSC协同抑制MSC-de MFB细胞α-SMA及纤维化相关细胞外基质基因表达。