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自从上个世纪酶的固定化技术问世以来,由于其具有广泛的应用前景,酶的固定化技术发展十分迅速。其中载体材料作为酶的固定化技术的重要组成部分,由于载体材料自身的结构及性能在很大程度上影响到其固定化酶的理化性质,因此载体材料已成为酶的固定化技术研究领域的重要内容。本论文综述了固定化酶的制备方法及固定化载体材料的国内外研究进展,并着重介绍了合成高分子载体材料的发展,由此设计和制备了具有不同链长的亲水柔性链的高性能优良固定化酶载体,并在此基础上,改变柔性链上功能基团的分布,系统研究柔性链长短和柔性链上功能基团分布对固定化脂肪酶酶活的影响。具体来说,主要进行了以下方面的研究和探索: 1.通过原子转移自由基聚合法(ATRP)合成了亲水性、柔性、触角状环氧化酶固定化载体(PS-acyl-P(AM-co-GMA)),通过改变单体总量与引发剂量比例得到不同链长触角状环氧化酶固定化载体,并将其用于耐有机溶剂脂肪酶(YCJ01)的共价柔性固定化,重点考察了链长短对固定化酶酶活的影响。结果表明:链长(增重率不超过3200%)越长,酶活越高。 2.通过原子转移自由基聚合法(ATRP)制得具有亲水性和柔性的触角状环氧化酶固定化载体(PS-acyl-P(AM-co-GMA)),通过改变单体总量与引发剂量比例及开环、闭环三种方法得到不同环氧基分布的触角状环氧化酶固定化载体的柔性链结构,将其用于耐有机溶剂脂肪酶(YCJ01)的共价柔性固定化,重点考察了链结构环氧基分布对固定化酶酶活的影响。结果表明:(1)环氧基分布链底端或链末端亲水(即先开环载体)载体固定化酶效果最好,环氧基均匀分布(即原载体)居中,环氧基分布链顶端或链末端疏水(即后闭环载体)载体固定化酶效果最差;(2)在增重率为2300-4100%的链长范围内,相同链长时,先开环载体环氧基量在高于2.5 mmol/g时,固定化酶酶活与环氧基量无关;而后闭环载体随着环氧基量的增加,对应固定化酶酶活逐渐增加。 3.根据柔性链末端具有少量羟基载体固定化酶,能维持较高酶活这一结论,希望将柔性链末端的少量亲水性羟基替换为既具有亲水性基团,又具有生物相容性的两性离子化合物,进而研究其对固定化脂肪酶(YCJ01)酶活的影响。主要工作如下:在触角状环氧化酶固定化载体的基础上,保留(大)部分环氧基,以少部分环氧基与L-苯丙氨酸反应,得到末端含有L-苯丙氨酸的L-Phe两性离子末端分布的触角状环氧化酶固定化载体。再用L-Phe两性离子末端分布的触角状环氧化酶固定化载体对脂肪酶进行柔性固定化,考察含两性离子柔性链结构对柔性固定化脂肪酶(YCJ01)酶活的影响,并验证在柔性链末端具有少量亲水性基团时,是否仍能维持较高酶活,结果表明:L-Phe两性离子末端分布的触角状环氧化酶固定化载体固定化酶酶活规律与“先开环法”制备链末端具有亲水性羟基的载体固定化酶酶活规律相同,且L-Phe两性离子末端分布的触角状环氧化酶固定化载体固定化酶酶活还略高于“先开环法”制备链末端具有亲水性羟基的载体。