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平滑肌发生收缩反应的细胞内机制包括“钙依赖”途径和“非钙依赖”途径,这两条途径相互协调,使平滑肌持续稳定的收缩。研究表明,富含脯氨酸的酪氨酸蛋白激酶(Pyk2)在血管平滑肌细胞的分化、收缩等过程中可被激活并起到促进作用,但是在胃肠平滑肌细胞中至今未见到类似报道。此外,许多心血管疾病的发生存在血管平滑肌细胞中Pyk2活性以及“非钙依赖”途径相关的RhoA/ROCK通路的异常,提示肠动力紊乱性疾病的发病可能也与胃肠平滑肌中的该因素相关联。由于结肠传输功能异常在临床较常见,因此,本研究首先在正常小鼠上探讨了Pyk2与结肠平滑肌收缩之间的关系,其次在先天性巨结肠(HD)患者结肠中,探讨了Pyk2介导的收缩过程是否与该疾病结肠动力异常的发生相关。本研究利用生理学方法离体平滑肌收缩实验检测结肠平滑肌的收缩功能、利用分子生物学方法免疫印迹技术检测相关功能蛋白的表达、利用HE染色观察结肠肠壁结构的变化。结果表明,正常小鼠结肠肌细胞内有Pyk2的蛋白表达;且在Pyk2被抑制时,结肠平滑肌自发收缩减弱,但与“钙依赖”途径相关的蛋白表达没有改变,而与RhoA/ROCK通路相关的蛋白表达减少;在Ach诱导平滑肌收缩时,P(Tyr402)-Pyk2表达增多,与RhoA/ROCK通路相关的蛋白表达增加。以上结果提示,在正常小鼠体内,Pyk2通过与RhoA/ROCK通路相关联参与结肠平滑肌的收缩过程。其次,在HD患者结肠中,我们发现与正常对照相比,结肠狭窄段平滑肌的收缩明显增强,狭窄段肌层明显肥厚;且在狭窄段肌层中Pyk2表达减少,结肠狭窄段中与RhoA/ROCK通路相关蛋白表达减少,而扩张段的表达与正常对照相比差异不明显。上述实验结果提示,小鼠结肠平滑肌细胞表达Pyk2,且其通过与RhoA/ROCK通路相关联参与结肠平滑肌的收缩过程;在HD患者中,结肠狭窄段的平滑肌收缩较强,这可能与该部位“非钙依赖”途径中Pyk2-RhoA/ROCK通路的减弱所致的“钙依赖”途径的代偿性增强有关。