论文部分内容阅读
本文采用本研究室建立的农杆菌介导的香蕉枯萎病菌4号小种转化系统,继续进行大规模的遗传转化和突变体筛选,并对所筛选到的致病力减弱的3个突变体进行了深入的研究,获得致病相关基因的部分基因序列,为香蕉枯萎病菌致病机理的研究积累了有价值的数据。主要结果如下:
1、通过共35批的转化,获得了有4300个转化子的香蕉枯萎病菌4号生理小种突变体库。
2、通过对转化子的初筛和复筛,得到5个致病力明显减弱的突变体,分别为J410、C639、C640、C1150、C1576;并用Southern杂交技术验证了T-DNA的拷贝数,这5个致病力明显减弱的突变体均为单拷贝插入。
3、比较了3个目标突变体主要的生物学特征,在大孢子粘孢产生时间、产孢量、菌丝直线生长速度、菌丝生长量等与野生型菌株无明显差异。
4、通过TAIL-PCR和克隆等技术得到了突变体基因的部分序列,在Genbank中进行Blastx分析,突变体C1150被打断的基因与Aspergillus oryzae、Gibberella zeae PH-1、Aspergillus terreus NIH2624、Scopulariopsis sp.rp383等菌株编码一糖苷酶的部分氨基酸序列的相似性分别为75%、71%、70%、70%。突变体C1576被打断的基因与Fusarium oxysporum、Gibberella zeae PH-1、Chaetomium globosum CBS 148.51、Magnaporthe grisea 70-15等菌株编码锌指蛋白家族中的一个转录因子的部分氨基酸序列的相似性分别为98%、98%、95%、84%,该基因是尖孢镰刀菌的致病基因。突变体J410突变基因经Blastx搜索,没有相似序列被报道,需进一步研究。