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柠檬酸是决定柑橘类水果风味品质的重要因素。柠檬酸的积累是一个复杂而精密的代谢过程,受其合成、分解利用及贮藏运输三者的共同调控。由于不同品种的柑橘果实柠檬酸的积累含量和模式不同,因此系统分析不同品种果实发育过程中柠檬酸积累相关基因的变化,确定导致柠檬酸积累动态差异的关键基因,对完善柑橘果实柠檬酸积累理论,提高果实风味品质具有重要意义。本实验先以温州蜜柑和早香柚为材料,系统比较果实发育过程中柠檬酸积累动态与柠檬酸积累相关基因的表达关系,确定影响柑橘果实柠檬酸积累的可能关键因子。然后再以纽荷尔脐橙、柠檬和无酸柚为材料,比较分析不同品种的柑橘果实柠檬酸积累动态与可能关键因子的表达关系。综合以上两部分结果,初步确定影响柑橘果实发育过程中柠檬酸动态积累的关键因子。实验主要研究结果如下: 1.不同品种的柑橘果实在发育过程中柠檬酸的积累水平具有差异。测定柠檬酸的积累动态可知,在试验采样期间,温州蜜柑和早香柚的柠檬酸积累先上升后下降,纽荷尔脐橙的柠檬酸积累逐渐下降;柠檬的柠檬酸积累逐渐上升;无酸柚持续低积累柠檬酸。 2.在常规柠檬酸积累模式的柑橘果实中(即温州蜜柑、早香柚、纽荷尔脐橙),其柠檬酸积累主要与Mit-Aco、CsCit1的负调控和质子泵的正调控有关,但温州蜜柑果实中的柠檬酸在液泡中的积累与V-PPase和V-ATPase有关,而早香柚和纽荷尔脐橙则与CsPH8有关。 3.在柠檬酸积累持续上升模式的柑橘果实(即高酸柠檬)中,柠檬酸积累与Mit-Aco低活性、CsPH8的上调表达、CsCit1的低表达有关。 4.在柠檬酸持续低积累模式的柑橘果实(即无酸柚)中,柠檬酸积累与Mit-Aco高活性、CsPH8和VHP3的低表达和CsCit1的高表达有关。 通过比较这几个不同积累模式柑橘果实的柠檬酸积累相关基因的表达分析发现,决定柑橘果实中不同柠檬酸积累模式差异的关键因子可能是Mit-Aco、蛋白载体(CsCit1)和质子泵(V-PPase、V-ATPase和CsPH8),而决定柠檬酸积累常规模式和柠檬酸持续低积累模式的差异的关键质子泵是CsPH8。