血塞通注射液是利用从五加科植物三七[Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen]根中提取的有效部位-三七总皂苷（Panax Notoginseng Saponins,PNS）精制而成的灭菌水溶液,是目前中药注射剂中年销售额最大的品种之一,具有活血化瘀,通脉活络之功效,临床用于中风偏瘫、动脉粥状硬化性血栓性脑梗塞、脑血栓、脑血管出血后遗症及视网膜中央静脉阻塞等症的治疗。研究中药注射液的药效物质基础,对注射液的质量控制及提高,保证用药安全以及基于药效物质基础研究的中药注射剂的二次开发均具有重要意义。为此本文首先系统地研究了血塞通注射液中皂苷类化学成分及其含量,并通过这些单体皂苷及其混合物的抗血小板聚集活性研究探讨了这些皂苷类成分与血塞通注射液的功能主治的相关性。本文首先按照血塞通注射液的制备工艺,制备了三七总皂苷,并对其化学成分进行了分离与鉴定。结果从中分离并鉴定了20种人参皂苷类成分,包括10种常见人参皂苷和10种稀有人参皂苷。其中常见人参皂苷有人参皂苷F1、Rg1、Rf、Rg₂、Re、Rd、Rb1、Rb2、Rb₃和三七皂苷R1;稀有人参皂苷有人参皂苷Rk₃、Rg₆、F₄、Rk₁、Rg₅、20（S）-Rh₁、20（R）-Rh₁、20（S）-Rg₃、20（R）-Rg₃和三七皂苷R₂。为探明血塞通注射液中上述人参皂苷类化学成分的含量,本文利用不同的分析方法对注射液中的常见人参皂苷、稀有人参皂苷和三七皂苷进行了含量测定,首次建立了血塞通注射液以及三七药材中稀有人参皂苷类成分含量测定的新的前处理方法。首先,采用离子液体双水相萃取-高效液相色谱法对血塞通注射液中的稀有人参皂苷类成分进行了分析,测定了其中7种稀有人参皂苷（人参皂苷Rg₆、F₄、Rk₃、Rk₁、Rg₅、20（S）-Rg₃和20（R）-Rg₃）的含量。通过实验条件优化,最终建立了注射液用量为3.0 m L、超声萃取时间为5 min、体系p H为9.3,萃取体系为1.00 m L[Bmim]Br离子液体和3.50 g K₂HPO₄的样品前处理方法。本方法7种稀有人参皂苷的检出限在0.17⁰.48μg m L-1范围内,加标回收率在89.05%¹11.29%（n=6）范围内,其RSD值范围为0.47².47%（n=6）,说明此方法准确,灵敏度高,重现性好,适用于测定血塞通注射液中微量稀有人参皂苷的含量。实验结果表明,同一厂家不同批次的产品中7种稀有人参皂苷成分的含量无明显差异,不同厂家相同规格（50 mg/m L）的注射液中7种稀有人参皂苷单体在血塞通注射液（50 mg/m L）中的含量具有一定的差别,分别在86.01⁹5.10（Rg₆）、48.30⁶0.81（F₄）、132.89¹56.76（Rk₃）、199.90²23.83（20（S）-Rg₃）、84.39¹05.25（20（R）-Rg₃）、52.64⁶0.22（Rk₁）、51.60⁷0.12（Rg₅）μg/m L范围内;7种稀有人参皂苷成分的含量之和无明显差异,分别为714.08、713.06μg/m L。接着本文利用高效液相色谱法对血塞通注射液中7种常见人参皂苷（人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁、Rd、Rb₂、F₁和三七皂苷R₁）进行了含量测定。结果表明,血塞通注射液中常见人参皂苷的含量比稀有人参皂苷高很多,它们在血塞通注射液（50 mg/m L）中的含量分别在4.44⁵.09（R1）、12.59¹3.84（Rg1）、1.81¹.91（Re）、13.37¹4.35（Rb1）、0.74⁰.96（Rb2）、0.085⁰.132（F1）、3.46³.90（Rd）mg/m L范围内。为明确血塞通注射液中稀有人参皂苷类成分是来自于三七还是来自于注射液制备过程中的其他环节,本文对三七中的稀有人参皂苷进行了含量测定。为了防止三七中的常见人参皂苷高温下发生水解产生原本不存在的稀有人参皂苷,影响测定结果的准确性,本文建立了超声辅助离子液体双水相提取法,在常温下对三七中的稀有人参皂苷进行了提取,并利用高效液相色谱法进行了含量测定。通过优化实验条件,建立了利用5.0 m L水、1.00 m L[Bmim]Br离子液体、7.0 g K₂HPO₄的提取体系,室温超声提取20 min的样品前处理方法。实验结果,从三七中共检出3种稀有人参皂苷,它们分别是Rk₃、20（S）-Rg₃和Rk₁。本测定方法的检出限在0.18⁰.48μg m L-1范围内,加标回收率在92.07%¹10.55%（n=6）范围内,其RSD值范围为2.38⁵.43%（n=6）。对三批三七药材的测定结果表明,上述3种稀有人参皂苷在三七中的含量分别在0.001271⁰.001406%（Rk₃）、0.02238⁰.02292%（20（S）-Rg₃）、0.002485⁰.002730%（Rk₁）范围内。与三七药材相比,血塞通注射液中出现了4种药材中并不存在的稀有人参皂苷20（R）-Rg₃、Rg₆、F₄、Rg₅。这可能与三七总皂苷制备、注射液配制、灭菌等过程有关,在上述过程中常见人参皂苷在较高温度下发生了脱糖、脱水等反应。大量的临床应用证明血塞通注射液对脑梗塞、脑血栓及视网膜中央静脉阻塞等症具有确切的疗效,而血小板聚集是引起此类血栓性疾病的最关键的因素之一。为探明血塞通注射液中上述人参皂苷类成分与抗血栓药效作用之间的关联性,本文利用抗二磷酸腺苷（ADP）引发的血小板聚集药物筛选模型,研究了血塞通注射液及按照测得的市售血塞通注射液中各人参皂苷实际含量配制的常见人参皂苷混合物,稀有人参皂苷混合物,常见人参皂苷+稀有人参皂苷混合物（总皂苷混合物）对ADP引发的血小板聚集的抑制作用。结果显示,血塞通注射液,常见人参皂苷混合物,稀有人参皂苷混合物以及总皂苷混合物均表现出较好的抑制活性。常见人参皂苷混合物,稀有人参皂苷混合物以及总皂苷混合物抗ADP引发的血小板聚集活性大小顺序为总皂苷混合物>常见人参皂苷混合物>稀有人参皂苷混合物。接着,本文研究了血塞通注射液中含有的常见人参皂苷和稀有人参皂苷单体对ADP引发的血小板聚集的抑制作用。结果显示,血塞通注射液中的15种人参皂苷单体中除人参皂苷F₁外,其余14种皂苷单体均表现出较好的抑制活性,且具有浓度依赖性。在同一浓度下,除人参皂苷Rk₃、Rh₁外,稀有人参皂苷单体比常见人参皂苷单体均表现出了更高的抑制活性,14种皂苷单体抗ADP引发的血小板聚集活性大小顺序为Rg₅>Rk₁^Rg₆>F₄>Rg₃>Rd^Re^Rb₃^Rb₂>Rk₃>Rh₁>Rb₁>R₁>Rg₁。上述研究结果表明,血塞通注射液中的皂苷类成分是其抗血栓作用的药效物质基础,其对脑梗塞、脑血栓及视网膜中央静脉阻塞等疾病的治疗作用可能来源于其中的人参皂苷类成分。在同一浓度下,稀有人参皂苷单体的抗血小板聚集活性比常见人参皂苷单体强,但是按照注射液浓度配比,稀有人参皂苷混合物的活性没有常见人参皂苷混合物强,这可能与其在注射液中的浓度明显低于常见人参皂苷有关。由此可以预期通过提高注射液中稀有人参皂苷含量,可以进一步增强其抗血栓药效作用。总之,本文通过对血塞通注射液中人参皂苷类化学成分的分离、鉴定及含量测定,探明了血塞通注射液中的人参皂苷类成分的种类及含量,并通过抗ADP引发的血小板聚集活性研究,初步证明了其中的人参皂苷类成分是其主要药效物质之一。本研究结果不仅对血塞通注射液的药效物质基础研究提供了参考,同时对血塞通注射液质量标准的提高、用药安全以及二次开发提供了新的科学依据。