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【目的】虽然急性B淋巴细胞白血病和B细胞恶性淋巴瘤的治疗效果取得了很大提高,但是仍然有一部分患者是复发难治的。靶向CD19嵌合抗原受体(CAR19)T细胞疗法引起了前所未有的治疗效果。然而,CD19阴性复发是CAR-T治疗失败的最常见原因,并且缺乏有效的治疗手段,因此需要我们寻找新的治疗方法。我们分别构建了靶向CD19和CD22的第三代CAR慢病毒载体,在体内外验证了有效性和安全性。在本中心,我们进行了一项开放标签,单中心和单臂临床试验研究,以探索联合序贯输注抗CD19和CD22 CART治疗r/r B-ALL/NHL患者的疗效和安全性。【方法】构建靶向CD19和CD22 CAR的慢病毒载体,共转染到293T细胞中包装慢病毒。磁珠分选供者的CD3+T细胞后进行慢病毒转导,在体外大量扩增并检测病毒转染效率和凋亡比例。另外进行体外杀瘤实验,细胞因子分泌,CD107a表达等实验,来验证CD19和CD22 CART细胞的体外功能;在NSG异种移植小鼠模型中验证CD19和CD22 CART细胞在体内的杀伤肿瘤效应。89例难治复发的B-ALL/B-NHL患者入组参加本中心联合序贯输注抗CD19和CD22CART治疗的临床试验。统计分析患者的诊疗经过,以系统评估二者联合应用的安全性和有效性。对患者的遗传学因素和其他临床参数进行分析,探索其对CAR-T细胞疗法的预后价值。【结果】成功构建了第三代抗CD19 CAR和CD22 CAR,稳定高效地在T细胞上表达,凋亡水平无明显增加。检测体外杀瘤效应,细胞因子分泌以及CD107a表达,都显示了CAR-T细胞良好的功能。抗CD19 CAR-T和CD22 CAR-T细胞在体内也展现了良好的杀伤肿瘤效应,而且不引起治疗相关毒性反应。在体外功能方面,CD19 CAR-T和CD22CAR-T细胞之间均无明显差异。51例B-ALL的队列中,MRD阴性反应率为96.0%(95%置信区间(CI),86.3至99.5)。中位随访时间为7.6个月,中位PFS为12.0个月(95%CI,5.4至18.6),未达到中位OS(NR)(95%CI,10.1至NR)。38例B-NHL的队列中,总有效率为72.2%(95%CI,54.8~85.8),完全缓解率为50.0%(95%CI,32.9~67.1)。中位随访时间为5.3个月,中位PFS为5.8个月(95%CI,3.3至NR),中位OS为NR(95%CI,6.1至NR)。CAR19/22 T细胞治疗后未检测到CD19或CD22的丢失。重度CRS和CRES发生率分别为22.4%和13.5%。除一例外,均可逆转。【结论】第三代抗CD19 CAR-T和CD22 CAR-T细胞,在体内外是安全,有效和特异的。联合序贯输注CAR19/CAR22 T细胞治疗B细胞恶性肿瘤是有效且安全的,并且可以克服CD19/CD22靶向治疗中的抗原丢失复发问题。