背景:内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPC)作为血管内皮细胞的前体细胞,在机体生理性及病理性血管生成中发挥着关键作用,参与血管再内皮化以及促进血管损伤修复。研究表明有心血管危险因素患者的外周血中循环EPC的数量减少、功能受损。高血压作为一个独立的心血管疾病危险因素严重危害内皮细胞功能,促进血管粥样硬化的发生、发展。本研究发现,与正常组人群相比,高血压患者外周血EPC早、晚期凋亡率升高,氧化应激反应增强,细胞的增殖、迁移、粘附能力减弱;当加以降压药物-贝那普利处理高血压患者外周血EPC后,细胞的凋亡率降低、氧化应激反应下降,同时细胞的增殖、迁移、粘附功能也得到显著的改善。表明贝那普利改善高血压条件下EPC的功能,并具有浓度和时间依赖性。本研究中采用贝那普利与SDF-1/CXCR4轴的抑制剂AMD3100联合干预高血压条件下培养的EPC,发现阻断SDF-1/CXCR4后,贝那普利对高血压环境下EPC功能的改善受到显著的抑制,表明高血压作为临床中的独立心血管危险因素严重损害EPC的功能。同时进一步的研究也揭示了贝那普利作为一种降压药在降压的同时还具有改善高血压条件下EPC的功能,且通过SDF-1/CXCR4轴发挥其生物学作用。本研究为贝那普利治疗高血压的机制作一新的探索,为内皮干细胞治疗高血压患者奠定理论依据。目的:通过研究贝那普利对高血压患者外周血分离的内皮祖细胞功能和氧化应激反应的影响,进一步探索贝那普利改善高血压患者EPC功能和氧化应激反应的可能机制。内容:1.首先分离、培养获得人外周血EPC,通过表面抗原及相关指标对分离得到的细胞进行鉴定;2.从正常组、高血压组及贝那普利干预后高血压组人外周血中分离EPC,并检测细胞增殖、迁移、粘附能力、凋亡及氧化应激反应;3.检测不同组EPCSDF-1和CXCR4的mRNA和蛋白表达变化。方法:入选确诊的1级高血压患者15例,并排除相关其他混杂因素,同时入选15例年龄、性别与研究组相匹配的健康体检者作为正常对照组;静脉采取新鲜外周血分离EPC,体外培养、观察并进行鉴定。AnnexinV-FITC/PI法检测EPC细胞的早、晚期凋亡率;ELISA法检测EPC细胞的氧化应激指标SOD、MDA和SDF-1。MTT法检测正常组、高血压组以及贝那普利不同浓度、不同时间干预条件下EPC细胞的增殖能力;Transwell法检测细胞的迁移能力;细胞计数法检测在人纤维连接蛋白存在下不同组别、不同处理条件下EPC细胞的粘附能力。Real-time PCR方法检测细胞CXCR4 mRNA的相对表达量。结果:1.显微镜下观察培养获得形态类似EPC的细胞,CD133和CD34流式鉴定符合EPC特异性表面标记;同时acLDL-DiI和UEA-1双阳性鉴定其具有EPC功能。2.高血压患者EPC早、晚期凋亡率明显要高于健康体检者,贝那普利干预可以改善高血压患者EPC的早晚期凋亡率,且随着贝那普利浓度的升高以及干预时间的延长,凋亡率逐渐下降;SOD在高血压患者中水平降低,而MDA则相反,贝那普利干预可以使高血压患者EPC的SOD水平升高,MDA的水平降低。3.高血压患者外周血EPC相比正常对照组细胞增殖、迁移、粘附能力显著降低;而贝那普利干预后EPC的上述功能得到明显改善,而且具有浓度与时间依赖性。4.相比对照组,贝那普利干预后高血压组EPC凋亡率、氧化应激以及增殖、迁移、粘附能力明显得到改善(与之前结果一致);贝那普利联用AMD3100抑制SDF-1/CXCR4后相比单纯贝那普利干预下,AMD3100抑制了贝那普利对高血压患者EPC细胞相关功能的改善;高血压患者中CXCR4 mRNA的表达下调,贝那普利干预可促进CXCR4 mRNA的表达,而贝那普利联用AMD3100干预后细胞CXCR4基因表达下调;贝那普利干预后可促进SDF-1的分泌,联用AMD3100后SDF-1分泌量降低。结论:1.成功分离得到高血压患者及正常健康体检者的EPC,并培养得到传代后形态稳定的EPC。2.高血压患者外周血EPC相比健康体检者凋亡率升高,氧化应激反应增强,细胞增殖、迁移和粘附能力下降;3.ACEI类降压药贝那普利干预高血压患者外周血EPC可明显改善细胞的凋亡率和氧化应激反应,促进EPC的迁移、增殖和粘附能力,且具有浓度、时间依赖性;4.贝那普利在改善高血压患者外周血EPC功能中SDF-1/CXCR4轴具有重要的作用。