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成年哺乳动物视神经近端损伤后,视网膜节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)短期内大量死亡。研究表明,其原因可能为:靶源性神经营养因子(neurotrophicfactors,NTFs)的缺乏;胞内Ca<2+>超载;一氧化氮和自由基的产生;兴奋性氨基酸的毒性作用。而给予。NTFs、Ca<2+>通道阻断剂、一氧化氮合酶抑制剂、自由基清除剂或谷氨酸受体拮抗剂均能在不同程度上提高RGCs的存活率。
骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是多见于骨髓中的一种成体干细胞,具有自我更新能力和多向分化潜能。研究表明,MSCs可以修复CNS结构与功能的损伤,且这一作用与其分泌。NTFs有关。三七总皂苷(total panaxnotoginseng saponins,tPNS),五加科人参属植物三七的主要有效成分,是一种Ca<2+>通道阻断剂。有研究表明,tPNS可以保护颅脑损伤。本课题在前期研究基础上探讨玻璃体注射MSCs或/和tPNS对视神经横断后RGCs存活的影响。论文分为四个部分:
第一部分 MSCs的分离培养与鉴定。结果:用全骨髓法培养MSCs并作初步鉴定,获得了足够数量的合格细胞。
第二部分玻璃体移植MSCs对视神经横断后6周内RGCs存活的影响。结果:单次移植定量MSCs,与对照组相比,在视神经横断后5 d、7 d、14 d、4 w和6w时均可提高RGCs的存活率(P<0.05)。
第三部分玻璃体注射tPNS对视神经横断后6周内RGCs存活的影响。结果:多次注射最佳浓度的tPNS,与对照组相比,在视神经横断后5 d、7 d和14 d时均可提高RGCs的存活率(P<0.05),而4 w和6 w时RGCs的存活率未见提高(P>0.05)。
第四部分两种处理方法联合对视神经横断后2周内RGCs存活的影响。结果:单次移植定量MSCs并多次注射最佳浓度的tPNS,与对照组相比,在视神经横断后5 d、7d和14d时均可提高RGCs的存活率(P<0.05);但与任何一种单独处理相比,RGCs存活率未见提高(P>0.05)。
结论:
1.全骨髓法可有效扩增MSCs,且简便易行。
2.玻璃体移植MSCs可促进视神经横断后6 w内RGCs的存活,且7 d时作用最为显著。
3.玻璃体注射tPNS可促进视神经横断后2 w内RGCs的存活,且有剂量-效应关系。
4.两种处理方法联合可促进视神经横断后2 w内RGCs存活,但作用无协同性。