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目的(1)检测Cortactin(CTTN)在结直肠肿瘤组织中的表达,探索其在结肠癌细胞中的生物学作用,研究CTTN在结直肠癌发生发展中可能的分子机制。(2)探索CTTN在结直肠癌细胞中生物学功能的调控方式。方法(1)采用qRT-PCR检测61例结直肠癌组织中CTTN的表达,统计分析其与病理特征之间的关系。(2)CTTN-siRNA瞬时转染结直肠癌细胞后,应用CCK-8、EdU标记技术、Transwell实验分别检测CTTN下调后对结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移功能的影响。(3)利用慢病毒转染技术构建CTTN稳定下调和过表达的细胞株。应用CCK-8,Transwell实验,克隆形成实验检测CTTN表达下调和增加条件下对结直肠癌细胞的增殖、运动能力的影响。(4)裸鼠皮下移植瘤模型、肺转移、肝转移动物模型,检测CTTN表达下调后结直肠癌细胞活体内成瘤和转移能力。(4)蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测CTTN表达改变后结直肠癌细胞株对EGF诱导的EGFR减量下调的影响,检测CTTN是否增强了EGF对肿瘤细胞的促增殖作用。(5)用CST-PathScan芯片筛查CTTN对EGFR下游信号通路的影响,并用WB进一步验证。(6)通过生物学信息分析发现PZR与CTTN生物学功能类似,可能存在相互作用,采用免疫共沉淀(CoIP)验证二者在体外的相互作用。(7)瞬时转染PZR-siRNA,通过CCK-8、Transwell实验检测PZR对结直肠肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移的影响。(8)构建PZR下调、上调的稳转细胞株和伴有CTTN稳定下调的PZR过表达细胞株,进行增殖、运动实验研究。(9)通过qRT-PCR检测PZR在61例结直肠肿瘤组织中的表达,统计分析其与病理特征之间的关系。(10)通过WB检测参与PZR与CTTN相互作用的蛋白。结果(1)人结直肠肿瘤组织中CTTN表达增加,且与淋巴结转移、病理分期(TNM)呈正相关。(2)CTTN的表达促进了结直肠肿瘤细胞体内外增殖、运动能力。(3)CTTN的表达上调了EGFR的表达,参与EGF诱导的EGFR减量下调(4)CTTN增强了EGF的促增殖作用,促进了ERK的磷酸化。(5)PZR作为CTTN的结合蛋白,其表达也促进了结直肠肿瘤细胞的增殖、运动(6)PZR可以通过SRC增强CTTN的活性,促进细胞转移、增殖。(7)PZR在人结直肠肿瘤组织中高表达,与病理分期、淋巴结转移正相关。结论CTTN在结直肠癌细胞中通过上调EGFR表达,增强ERK磷酸化而促进细胞增殖、运动;PZR通过激活SRC增强了CTTN的磷酸化,促进了结直肠肿瘤细胞的增殖和运动。