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目的： 复制糖皮质激素-地塞米松（DXM）诱导的人成骨细胞（Saos-2）体外损伤模型，证明狭鳕鱼皮胶原蛋白肽（CPWPS）经TGF-β1/AKT/RUNX2/SIRT6信号通路对成骨细胞的保护作用；并确认小分子肽Pro-Hyp和Gly-Pro-Hyp的生物活性。 方法： 以Saos-2细胞作为研究对象，CCK-8技术筛选DXM的最佳造模浓度，检测CPWPS对Saos-2细胞的毒性。实验分组：正常组、DXM组、阳性对照组（1.0×10-5 M RU-486）、DXM+CPWPS(100、200、400μg/mL)组、TGF-β1组、SC79组、Control siRNA组、Runx2-siRNA组。利用RT-PCR和Western blot技术检测DXM作用于Saos-2细胞12、24、36、48、64h后，TGF-β1、AKT、Runx2、Sirt6 mRNA蛋白经时表达变化，及不同处理组中AKT的磷酸化水平和TGF-β1、AKT、Runx2、Sirt6的表达变化，并运用特异性激活剂、siRNA转染技术证明其级联关系。建立高效液相色谱法检测各组细胞外液中Pro-Hyp、Gly-Pro-Hyp含量，以确定成骨细胞对CPWPS的代谢能力，采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析。 结果： CCK-8结果显示，1.0×10-5 M的DMX处理成骨细胞48h后，细胞存活率下降（P＜0.01）；100、200、400μg/mL CPWPS作用48h，可显著促进成骨细胞增殖（P＜0.05），10000μg/mL时出现细胞毒性；与模型组相比，CPWPS预保护48h可剂量依赖性地升高细胞存活率（P＜0.05）。经时表达变化结果显示，较之正常组，DXM作用于Saos-2后，TGF-β1mRNA及蛋白分别在48和60h时表达水平最低；Akt mRNA及蛋白表达水平均无显著性差异，而其磷酸化水平在48h时最低；Runx2 mRNA与蛋白表达趋势先升高后降低，60h时表达水平最低；Sirt6 mRNA及蛋白表达水平均呈时间依赖性地下降，分别在48h和60h时达到低谷（P＜0.05）。较之模型组，0.5 ng/mLTGF-β1作用12h后，AKT表达水平不变，但是p-AKT/AKT升高（P＜0.05），提示TGF-β1调控AKT磷酸化；5μM的SC79预处理Saos-2细胞2h后，Runx2与Sirt6蛋白表达水平升高（P＜0.05），提示Runx2、Sirt6受到AKT的调节；Si-Runx2转染6h后Sirt6蛋白表达量下降（P＜0.05），提示Sirt6是Runx2的下游，综上表明在DXM诱导的成骨细胞损伤过程存在TGF-β1/AKT/Runx2/Sirt6通路的调控。CPWPS孵育48 h后，TGF-β1、Runx2、Sirt6 mRNA及蛋白表达水平较模型组升高，AKT mRNA及蛋白表达水平不变，但p-AKT/AKT上升（P＜0.05）。与模型组相比，CPWPS+TGF-β1共孵育能够上调p-AKT/AKT的表达（P＜0.05）；SC79+CPWPS共孵育使Runx2和Sirt6表达水平升高（P＜0.05），相对于SC79单独处理组，SC79+CPWPS组Runx2蛋白表达上调，但无显著性差异；Runx2-siRNA+CPWPS组Sirt6蛋白表达水平较Runx2-siRNA组升高，说明CPWPS可调控Runx2/Sirt6；以上研究表明CPWPS可能是通过正向调控TGF-β1/AKT/Runx2/Sirt6通路拮抗DXM诱导的成骨细胞损伤。HPLC结果表明，Gly-Pro-Hyp线性关系式为y=2E+07x，R2=0.9984、Pro-Hyp线性关系式为y=3E+07x，R2=0.9987，线性关系良好；低、中、高浓度的Gly-Pro-Hyp的平均回收率分别为96.39%、99.56%和98.94%，RSD分别为0.91%、2.86%和1.73%，Pro-Hyp的平均回收率分别为96.83%、99.90%和99.27%，RSD分别为2.15%、3.02%、2.62%，提示小分子肽的加样回收率良好。与正常组比，模型组中Pro-Hyp含量显著降低（P＜0.05），0.25、0.5、1.0 mg/mLCPWPS组以及0.4 mg/mL的三肽组中Gly-Pro-Hyp、Pro-Hyp的含量较模型组均升高（P＜0.05），提示成骨细胞可将CPWPS代谢为小分子短肽。 结论： 1.0×10-5 M的DMX可成功复制成骨细胞损伤模型，DXM能够诱导Sirt6的低表达，CPWPS可能通过上调TGF-β1/AKT/Runx2/Sirt6通路，拮抗成骨细胞损伤；成骨细胞具有将CPWPS代谢为小分子活性肽Pro-Hyp和Gly-Pro-Hyp的能力。