一、研究背景心脑血管疾病,尤其是冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary artery disease,CAD),是世界范围内导致人类死亡的主要原因之一,造成了巨大的社会经济负担。虽然如药物治疗,经皮冠状动脉介入治疗,冠状动脉旁路手术等现代治疗方法改善了CAD的预后,但其死亡率仍然居高不下。因此,CAD早期阶段的检测非常必要,尤其是在左心室功能不全的早期,使用循环或成像生物标志物有助于在对有心血管不良事件的高风险的CAD患者早期识别。然而,现有的CAD生物标志物预测风险的水平有限。随着全基因组分析技术的发展,已经发现几乎所有人类的基因组都能转录并且产生大量长链非编码RNA(Long non-coding RNAs,lnc RNAs)。LncRNAs是一类长度范围大于200个核苷酸的RNA分子,研究发现Lnc RNA通过表观遗传,转录过程,转录后调节等多个层面在例如肿瘤,神经障碍疾病等诸多人类疾病中参与调控。最近,一些研究表明,一些lncRNAs参与例如心脏衰竭,心脏肥大,心脏代谢疾病和心肌梗塞等各种类型心血管疾病的发展。一些lnc RNAs,例如ANRIL,LincRNA-p21和心肌梗塞相关转录物-1(MIAT1),在动脉粥样硬化中显着增加,并可能在其发病机理中起着重要作用。LncRNAs在血浆和其它体液中稳定表达,因此,可以作为某些疾病的生物标志物。在尿液中前列腺特异性lncRNA PCA3已被认为是诊断前列腺肿瘤最特异性的生物标志物,比广泛使用的PSA(前列腺特异抗原)的检测具有更高的特异性。其他血浆lncRNA生物标志物,包括胃癌的lncRNA-H19,肝细胞肿瘤的lnc RNA-HULC和心脏衰竭后心肌梗死的lncRNA-LIPCAR。在本课题研究中,我们进行了人类全基因组lncRNA表达谱芯片分析,并在不同的对照组或冠心病组的人群中进行验证。经研究我们发现了一个血浆lncRNA并将其命名为lnc RNA-CoroMarker,可以在血浆中稳定表达,并存在于单核细胞来源的细胞外泌体(微泡),可作为CAD的敏感性和特异性标志物。二、研究目的lncRNAs已经被报道在多种心血管疾病的发病中发挥作用,但循环lncRNAs作为心血管系统疾病标志物的研究仍处于起步阶段。本研究通过基于临床冠心病患者标本的高通量筛选等方法,旨在鉴定出全新的冠心病循环lnc RNA生物标志并加以验证,为冠心病的早期诊断提供新的理论依据。三、研究方法1.临床血浆标本提取RNA后进行高通量mRNA及lncRNA芯片检测并利用生物信息学的方法分析检测结果;2.采用差速离心的方法提取血浆EVs;3.外周血单核细胞的收集和纯化;4.使用TRIzol提取血浆和外周血单核细胞总RNA并进行纯化;5.实时荧光定量PCR检测lncRNA的表达;6.受试者特征曲线(ROC)和曲线下面积(AUC)用来评估血浆CoroMarker作为CAD检测的新型诊断工具的可行性;7.采用Fisher标准观察作为CAD的标志物,联合性别,高血压,吸烟和饮酒,CoroMarker是否提高预测准确度;8.Pearson相关分析被用来验证单核细胞和血浆CoroMarker之间的关系。四、研究结果1.血浆长链非编码RNA,CoroMarker,在血浆中稳定表达,存在于外泌体(微泡)中,大部分来源于外周血单核细胞。2.Coro Marker表达水平在CAD患者中比对照组升高,ROC曲线分析CoroMarker可能作为预测CAD的候选生物标志物。3.对CoroMarker的预测价值进行了评估,相应的最优灵敏度从68.29%提高到78.05%,特异性略微从91.89%减少到86.49%。4.Coro Marker诊断CAD的特异性,与其他心血管疾病患者相比,CoroMarker水平在CAD患者血浆中特异性升高。五、结论Coro Marker在血浆中稳定表达,可作为CAD敏感性和特异性的生物标志物。