【摘 要】
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本实验室以红莲型细胞质雄性不育(HLCMS)水稻粤泰A(YTA)为材料,克隆了HL-CMS不育相关基因HLsp1。经生物信息学预测分析,发现一个可编码290个氨基酸的独立外显子,将该候选基因命名为orf290。利用分子标记,从AA型野生稻和824个栽培稻品系中成功筛选到只含有orf290的不育系。本研究利用原核和真核表达系统体外表达ORF290,从酵母膜蛋白文库初步筛选ORF290互作蛋白。主要取
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本实验室以红莲型细胞质雄性不育(HLCMS)水稻粤泰A(YTA)为材料,克隆了HL-CMS不育相关基因HLsp1。经生物信息学预测分析,发现一个可编码290个氨基酸的独立外显子,将该候选基因命名为orf290。利用分子标记,从AA型野生稻和824个栽培稻品系中成功筛选到只含有orf290的不育系。本研究利用原核和真核表达系统体外表达ORF290,从酵母膜蛋白文库初步筛选ORF290互作蛋白。主要取得了以下结果:1.利用原核表达系统诱导表达ORF290,并测定大肠杆菌生长曲线,结果表明ORF290可抑制大肠杆菌生长。2.利用真核表达系统在毕赤酵母细胞中表达ORF290,其生长曲线测定显示ORF290可抑制毕赤酵母生长,同时伴有ATP水平降低和ROS积累。这表明ORF290可通过降低ATP合成和活性氧的积累对毕赤酵母产生毒性。3.生物信息学分析表明ORF290的N端存在跨膜结构域,据此构建全长及C端诱饵蛋白载体,用于筛选ORF290互作蛋白。实验从初筛的39个ORF290潜在互作蛋白,进一步验证了2个ORF290潜在互作蛋白OsAPX8和E37。利用WoLF PSORT预测二者都定位于线粒体和叶绿体。OsAPX8可与FAD/NAD(P)结合域和谷胱甘肽转移酶互作。E37参与维生素E生物合成,与维生素E生物合成相关蛋白质TMT、VTE1、HPT1及HPT2均存在较强互作关系。
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