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目的：构建人源性抗碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)抗体的真核表达载体,优化载体转染的各种条件,提高抗体在293T细胞中的表达量。方法：设计引物从pComb3-Fab25中扩增抗体Fd、κ链基因片段,分别构建到表达载体pIgG、pIRES、pN(A+B)和pA(X+A)。质粒经脂质体jetPEI介导转染293T细胞,利用荧光蛋白表达载体pEGFP优化转染最佳条件,夹心ELISA检测细胞培养上清抗体的表达量。通过降低温度,插入嵌合内含子,添加脱乙酰基抑制剂等方法提高抗体在293T细胞中的表达水平。结果：DNA测序和酶切分析显示,抗体Fd和κ链基因成功构建到表达载体,获得了重组质粒pIgG-IgG、pIRES-Fab和pN(A+B)-Fd、pA(X+A)-κ。pEGFP优化jetPE转染293T细胞的条件为：PEI/DNA质量比为4：1,培养基中血清浓度为2%,转染时质粒用量为1μg,25μmol/L氯喹处理细胞6h,转染复合物与细胞作用时间为6h。重组质粒转染293T细胞48h后,夹心ELISA检测抗体浓度结果显示：载体pIgG表达水平最高,表达抗体浓度为2.1mg／L。通过向抗体基因序列5’端插入嵌合内含子、降低抗体表达温度(33℃),往培养基中添加丙戊酸(4mmol/L)3种方法,pIgG表达水平从2.1mg/L增加到12.3mg/L,提高了约6倍。同时,间接ELISA检测结果显示,抗体能够与bFGF发生特异性结合。结论：成功构建了含全人源性抗bFGF抗体基因的真核表达载体,并在293T细胞中得到表达,抗体表达量为12.3mg／L。