吉林人参HXK基因家族生物信息学分析及转化番茄的研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:yudalong880210
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己糖激酶(HXK)基因家族是参与植物基础代谢的重要家族之一,作为细胞呼吸过程关键酶之一,为植物生长发育提供基本的能量供给,并参与植物光合作用、衰老及抗病原体、调控植物花色等多个生物学过程。近几年,依赖HXK途径的多重糖感应机制备受关注。本研究从吉林人参248,993 Unigenes数据库中筛选出23条吉林人参HXK Unigenes,建立了吉林人参HXK Unigenes数据库,系统研究了其GO功能注释,保守结构域预测,起源与进化,家族成员间的协同互作关系及在不同组织器官中的表达量。结果显示,吉林人参HXK Unigenes包含PgHXK1、PgHXK2、Pg HXK3、PgGK、PgHXK5五个家族成员;对23条吉林人参HXK Unigenes进行GO Leve-2水平上的功能注释,分别注释到细胞过程、代谢过程、生物调节、催化活性等11个功能;共预测到3个吉林人参HXK保守区,Hex okinase2 super family(cl08402),NBDsugar-kinaseHSP70actin(cd00012)和PLN02405(P LN02405);吉林人参HXK基因家族成员功能及表达活性出现了一定程度的分化,KEGG代谢途径定位显示吉林人参HXK基因家族参与9个代谢途径,包括链霉素生物合成、淀粉和糖代谢等;尽管吉林人参HXK家族成员在不同组织器官中的表达量差异显著,但各家族成员多以集群的形式存在,其表达活性相互关联,协同合作。本研究选取在吉林人参14个组织器官中表达的HXK基因家族第Ⅳ类,即PgGK基因,克隆PgGK基因,成功构建PgGK基因的表达载体pBI121并转化外源物种番茄。同时选取含有已知基因β-AS和PgGK的人参大片段DNA C11(50kb)、含有已知基因P450和PgGK的人参大片段DNA C12(80kb)转化番茄。确定了番茄遗传转化的转化条件,包括预培养和共培养时间、菌液浓度、筛选压大小等因素。探究外源基因大小对番茄转化效率的影响,以及通过单基因PgGK和携带PgGK的大片段DNA转化番茄验证基因功能,为进一步研究植物基础代谢产物对次级代谢产物番茄红素的影响奠定基础。结果显示,单基因PgGK抗性芽诱导率5.45%,尚未得到抗性苗;大片段DNA C11抗性芽诱导率4.79%,转化率0.95%;大片段DNA C12抗性芽诱导率4.47%,转化率0.68%。初步得出结论外源基因越小转化效率越高。
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