恶性肿瘤已严重危害人类健康,世界卫生组织癌症研究机构(IARC)发布的最新数据称,2018年全球将有1810万癌症新发病例,其中960万患者将死于癌症,位居人类第二大非传染性疾病。目前,手术治疗、化学治疗和物理治疗是针对恶性肿瘤的主要治疗方式,传统的治疗手段可以有效提高肿瘤患者的生存率,但对某些肿瘤患者的治疗效果并不理想,无法控制肿瘤的复发和转移且存在毒副作用,易产生抗药性。在过去的数十年中,肿瘤的治疗方式产生了很大的突破。免疫治疗、靶向治疗和溶瘤病毒等新型肿瘤治疗方法不断兴起,为攻克肿瘤提供新的希望。其中,溶瘤病毒疗法是通过病毒特异性的感染并裂解肿瘤细胞发挥治疗作用,具有安全、高效、副作用小等特点,已发展为肿瘤治疗领域中的新兴热点,目前已有多种类型的溶瘤病毒药物上市或处于临床实验阶段。流感病毒属于单链、负义、分节段的RNA病毒,自1904年首次发现流感病毒可能作为“有益”病毒缓解白血病病情以来,不断有研究证明流感病毒具有杀伤肿瘤细胞的能力,利用反向遗传操作技术对野生型病毒进行改造,有望将其发展成为一种安全、有效的肿瘤治疗生物试剂。本研究的目的是通过评价多株野生型流感病毒的溶瘤活性,筛选出一株具有较好肿瘤杀伤能力的毒株,再利用反向遗产学操作技术对该病毒进行改造,提高其用于肿瘤治疗的安全性和有效性,探索流感病毒在肿瘤治疗中的前景。为此,我们展开了以下工作:首先利用免疫荧光实验和CCK-8试剂盒检测法建立了体外评估流感病毒感染及杀伤肿瘤细胞能力的平台,评价了 11株不同型别的野生型流感病毒对7种肿瘤细胞的感染及杀伤能力,并从中筛选出了三株对大部分肿瘤细胞具有较好杀伤能力的病毒。随后,我们检测了不同年龄段人血清中对这三株病毒的中和抗体含量,以及病毒在生产细胞MDCK中的培养滴度,确定将流感病毒株A/WSN/1933作为溶瘤候选株,用于后续的改造研究。本研究重点工作是对野生型流感病毒株A/WSN/1933的改造,一方面为了提高流感病毒用于肿瘤治疗的安全性,我们尝试改造病毒的NS1基因,另-方面为提高流感病毒的溶瘤能力,我们同时对病毒的HA基因进行改造,利用反向遗传操作技术进行病毒重组,并在32株不同的肿瘤细胞以及4种小鼠荷瘤模型中评价重组病毒的溶瘤能力,结果显示流感溶瘤病毒株WSN-V1194HA-73NS1对22株肿瘤细胞的体外杀伤能力达到50%以上,且可显著抑制4种小鼠荷瘤模型中肿瘤的生长,表现出良好的肿瘤治疗效果。最后,我们通过组化以及流式分析的方法初步探索了流感溶瘤病毒株WSN-V1194HA-73NS1治疗肿瘤的作用机制,结果提示该病毒可以诱导肿瘤细胞的凋亡也可以诱导肿瘤免疫微环境中T细胞的浸润,从而抑制肿瘤的生长,但更加具体的作用机制有待后续开展更加深入的研究。综上所述,本研究成功构建了一株安全、有效的流感溶瘤病毒株WSN-V1194HA-73NS1,并在体内外模型中验证了该病毒具有较好的溶瘤能力;此外,我们还初步探索了其肿瘤治疗机制。该研究为未来探索开发多种新型溶瘤病毒用于肿瘤治疗提供了参考依据。