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该研究从大黄鱼的体细胞的原代培养入手,建立大黄鱼体细胞系,以图为大黄鱼养殖业中业已存在的种质、病害等问题的解决提供有效的技术手段采用健康的二龄大黄鱼,参照左文功等方法进行原代培养:通过比较不同取材部位、取材方法、消化时间、血清等级及份数对原代培养结果的影响,试图建立适于该实验室的海水鱼细胞原代培养方法.按常规方法进行传代培养,建立稳定的细胞系,参照陈容敏等方法对所建肾组织细胞系进行生物学特性研究;并研究了不同血清份数对该细胞系生长的影响.参照Alva..MC尤峰等方法进行染色体的制备:参照张念慈等方法进行细胞保存的研究.结果表明:(1)体细胞的原代培养.通过对二龄大黄鱼进行原代培养实验,成功获得大黄鱼的吻端、肾脏、肝脏及背鳍的原代细胞、肝组织原代细胞培养方法是消化法,0.25%胰蛋白酶消化70min,M199培养基+20%FBS或NBS.肾组织细胞原代培养方法是组织块法或消化法,0.25%胰蛋白酶消化70min,M199培养基+20%FBS或NBS.吻端、鳍、鳃等组织细胞的原代培养方法是组织块法,M199+20%NBS或FBS.(2)大黄鱼肾细胞经过18个月传75代,建立稳定的成纤维样细胞大黄鱼肾细胞系,命名为PCK该细胞系适合在含5%~10%的新生牛血清(NBS)的M199培意养基中生长,适生长温度20~30℃,pH6.5~7.2,平均传代间隔时间为3d.(3)PCK细胞系为成纤维样细胞系:可以适于5-10%的NBS培养:最适宜温度范围在25~28℃:62代PCK细胞的倍增时间为55.7h;低温保存的程序为4 ℃平衡1h,70℃过夜,液氮口过渡后投入液氮;第11代细胞染色体数目变化范围在31~55之间,模式染色体数为18,属正常二倍体.63代PCK细胞染色体数目在32~86之间,正常染色体(2n=48)占统计量的14%,为异倍体细胞系.中国的细胞培养工作自张念慈等报导了中国第一株鱼类细胞株的建立以后有了快速的发展,但主要工作还集中于淡水鱼的研究,而海水鱼的细胞培养鲜有报导.近年来随着海水养殖业的迅猛发展,对海水鱼细胞培养工作产生了实践上的需求,同时分子生物学等技术的发展也对细胞培养产生了技术上的要求.研究海水鱼细胞培养方法,建立海水鱼细胞系,将有利于海水鱼病毒学、免疫学、遗传育种学、药理学及环境毒理学的研究,并进一步改善海水养殖业近况,促进海洋环境的保护,为海洋的更深层次的、健康的、合理的、开发利用提供可靠的依据.