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柑橘木虱(Diaphorina citri Kuwayama)是传播柑橘黄龙病(citrus huanglongbing,HLB)的唯一自然虫媒,严重危害我国柑橘生产,近几年害虫抗药性和食品安全问题的突显使得生物防治成为研究的热点。玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)是柑橘木虱优良的生物防治菌种,筛选对柑橘木虱高效的菌株、研制高致病力生物制剂对于柑橘木虱的防治具有重要意义。本文研究筛选了综合条件较好的玫烟色棒束孢菌株,优化液体与固体发酵培养基及培养条件,收获分生孢子,并初步研制玫烟色棒束孢悬乳剂,用于柑橘木虱防治。主要研究结果如下:1.通过将实验室保存的五株玫烟色棒束孢菌株(F-HY002-1A、F-HY002-4F、F-HY002-6D、F-HY002-7A和F-HY002-ACPHali)进行复壮,毒力初筛结果显示,在1.0 × 107 conidia/mL浓度下,五株菌株对柑橘木虱成虫的侵染率为67%-78%,各菌株间侵染率无显著差异(t=0.525,p>0.05);对五株菌株进行产孢特性和菌落生长速率进行评价,结果显示,菌株F-HY002-ACPHali的产孢量(2.30±0.46 conidia/mL)和菌落生长速率(3.13 mm/d)都高于其他四个菌株。综合考虑各项指标,确定选择菌株F-HY002-ACPHali为柑橘木虱生防菌优质菌种。2.以F-HY002-ACPHali为供试菌株,优化其液体培养部分的发酵培养基以及培养条件。通过单因子分析和正交设计法相结合筛选了液体发酵培养基的成分以及培养最优条件组合,结果表明,葡萄糖添加量为25 g/L、酵母浸粉添加量为25 g/L、CuS04和ZnSO4添加量100 mg/L、接种孢子悬浮液量6%(v/v),初始pH为6,摇瓶采用250mL锥形瓶装液60mL,在26℃,125 r/min摇床发酵72h,最大菌丝产量为19.0g/L,所产生的菌丝体用于之后的固体发酵。3.从麦麸、玉米粉、豆粕、花生饼粉、碎米和米糠6种培养基质中初步筛选得到产孢量最大的是玉米粉,通过正交试验确定玫烟色棒束孢固体发酵最优培养基及培养条件为:以玉米粉为主要培养基质,初始含水量为70%(v/m),初始pH 5,接种10%(v/m)的液体培养基,置于25℃条件下培养15天达到最大产孢量,产孢量为5.92 × 109 conidia/g基质。根据最优条件进行扩大发酵,产量为:平均每500克玉米粉产孢8.39g,平均每克高孢粉含孢子1.61 × 1011个,平均活孢率为92.34%。4.筛选了分生孢子悬乳剂配方的主要助剂,悬乳剂的制作过程为:以农业级矿物油为分生孢子的溶剂油,0.5%(v/v)的吐温-80为乳化剂、0.3%(v/v)的羧甲基纤维素钠为悬浮稳定剂、0.3%(v/v)的抗坏血酸为紫外线防护剂,将各助剂加入到矿物油中,搅拌均匀,之后加入10%(v/m)的高孢粉制成。悬乳剂储存稳定性良好,4℃和25℃储存90天,孢子萌发率仍不低于80%。该悬乳剂对于柑橘木虱的成虫表现出很高的致病性,LC50为1.60× 105 conidia/mL,低于孢子悬浮液的LC50(8.80× 106 conidia/mL)。