甾体皂苷是一类具有显著药理活性的次级代谢产物,是天然药物研究中重要的对象之一。甾体皂苷结构的多样性和相似性,给其分离纯化带来了困难。本论文基于新型色谱分离材料和色谱技术,建立甾体皂苷高效制备方法,开展了中药系统分离纯化工作,以及在此基础上开展的质量评价及活性筛选的研究。重楼中甾体皂苷的分离研究侧重于皂苷的富集和二维色谱的运用。根据皂苷含量差异,采用固相萃取法分别富集微量皂苷组分和常量皂苷组分。根据微量和常量皂苷组分溶解性差异,分别构建反相/亲水二维色谱和亲水/反相二维色谱,在两个组分中检测到202个和92个色谱峰,纯化获得23个化合物,其中4个化合物为重楼药材中首次发现。结果证明了由反相色谱和亲水作用色谱组合的二维色谱法是甾体皂苷纯化的有效方法。对常量皂苷组分进行质量评价,准确定性9个化合物,5个指标成分的含量可达63.68%。该组分具有化学组成基本清楚,质量可控的特点,可作为新药开发的物质资源。知母的分离研究侧重于系统分离和皂苷类分离。按照成分极性差异,在反相模式下将知母提取物分成强极性部分、中等极性部分和弱极性部分。中等极性部分含有皂苷与黄酮两类成分,依据它们电荷性质的差异,采用包含C18和季铵基团的混合模式色谱固定相实现两类化合物的选择性分离。实验评价了该固定相的疏水性、考察了 pH值和盐浓度对表面电荷性质的影响,测定了表面离子交换容量和黄酮饱合吸附量,研究了酸浓度对黄酮保留行为的影响。以甲醇为流动相,通过pH值改变来调控黄酮的保留,分别制备皂苷类组分和黄酮类组分。构建亲水作用色谱和反相色谱分离体系,从皂苷类组分中制备得到26个单体化合物,其中15个化合物为知母药材中首次发现。建立知母强极性部分分离方法,制备了 11个首次在知母药材中发现的化合物。该方法以亲水反相填料C18HCE为固定相,以纯水为初始流动相。该方法可解决极性化合物在传统反相模式下保留弱的问题。以制备得到的单体化合物为对象,考察极性基团种类和流动相组成对其保留行为的影响,为极性化合物的分离提供指导。知母弱极性部分的分离引入了超临界流体色谱法,考察了固定相种类、改性剂、柱温和背压对分离的影响。通过结合超临界流体色谱和反相色谱,从知母弱极性部分中纯化得到15个化合物,其中9个为知母药材中首次发现。超临界流体色谱法在分离弱极性化合物方面表现出优异的分离能力,是反相色谱良好的补充。开展皂苷类组分和化合物的活性筛选工作。重楼常量皂苷组分对A549细胞生长有显著抑制作用,可通过上调凋亡蛋白caspase-3的表达和下调抑制凋亡蛋白Bcl-2α的表达来诱导细胞凋亡。考察知母中26个化合物对经脂多糖诱导的N9细胞的抗炎作用及对iNOS和COX-2蛋白表达的影响。化合物Anemarrhenasaponin Ⅱ、Platycodin D和Platycodin D3具有显著的细胞毒性;化合物Timosaponin BⅢ和trans-Hinokiresinol对脂多糖诱导的N9细胞释放的NO有显著抑制作用,可显著降低iNOS和COX-2蛋白的表达,且存在剂量依赖效应。本论文围绕甾体皂苷分离纯化开展了包括分离材料、分离方法和分离模式的系统研究,尝试了中药的系统分离工作,用制备得到的类组分和化合物开展了质量评价与活性筛选工作。研究结果对甾体皂苷分离纯化、中药物质基础认识、质量标准提高及活性化合物的发现具有促进作用。