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背景与目的高危型人乳头状瘤病毒（high-risk human papillomavirus，HR-HPV）感染是宫颈癌主要的致病因素，目前，新的HR-HPV DNA检测技术和薄层液基细胞学（liquid-based thinprep cytology test，TCT），提高了子宫颈癌和癌前病变的检出率，但是，HR-HPV检测对宫颈鳞状上皮内高度病变（high-grade squamous intereapithelial lesion，HSIL）的阳性预测值始终很低，而薄层液基细胞学检查对其敏感性较差，有较高的假阴性率，限制了宫颈癌筛查有效性的进一步提高。近年一些文献报道，在宫颈癌组织中抑癌基因p16INK4A和PTEN出现异常表达，而且p16INK4A功能异常与HR-HPV感染密切相关，两者联合检测有望提高宫颈上皮内高度病变的检出率。本研究选p16INK4A、PTEN和HR-HPV三个指标在宫颈上皮组织和脱落细胞中联合检测，旨在探讨在宫颈上皮癌变过程中HR-HPV感染与p16INK4A、PTEN表达的关系，分析它们参与癌发生的分子机制，以及p16INK4A对细胞学诊断的临床价值，目前国内尚未见报道。材料与方法实验标本：宫颈石蜡包埋组织134例，包括正常宫颈组织30例，宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasias，CIN）Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为23例、26例、31例，浸润癌24例（鳞癌22例，腺癌2例），取自2003年10月～2005年12月郑州大学第一附属医院妇产科门诊活检和住院手术切除的宫颈标本，患者年龄21～65岁，平均35岁；89例液基细胞学（TCT）-未明确意义的不典型鳞状细胞（atypical squamous cells of undetermined significance，ASCUS）标本，取自2006年1月～2006年10月在郑州大学第一附属医院妇产科门诊就诊的的患者样本，病人年龄范围18～69岁，平均33岁；所有患者在取组织或细胞标本前，在宫颈外口和颈管内用取样刷采取宫颈脱落细胞和分泌物，接受HR-HPV DNA检测。取材前患者均未接受任何治疗。所有的组织学和细胞学标本均由两名病理医师诊断。实验方法：应用免疫组织化学染色法检测p16INK4A蛋白和PTEN蛋白在134例不同宫颈病变组织中的表达；应用免疫细胞化学染色法检测p16INK4A在89例TCT-ASCUS细胞片中的表达；用第二代杂交捕获法（hybrid capture 2，HC-2）检测每一病例的13种HR-HPV DNA。采用SPSS11.0统计软件，行（Chi-Square Test）x2检验，Spearman相关分析，检验水准α=0.05。同时进行敏感性（Se），特异性（Sp），阳性预测值（PPV），阴性预测值（NPV）分析。结果1．p16INK4A在CINⅡ／Ⅲ和宫颈浸润癌各组中为过表达（中、强阳性表达），在CINⅠ和正常宫颈组为阴性和弱阳性表达，阳性表达率在CINⅡ／Ⅲ和浸润癌各组明显高于CINⅠ和正常宫颈组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。p16INK4A免疫染色强度从CINⅠ至宫颈癌逐渐由弱变强，而且强阳性表达率呈梯度增高。2．PTEN中、强阳性表达主要在CINⅠ和正常宫颈组，阳性表达率明显高于CINⅡ／Ⅲ、浸润癌各组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。3．HR-HPV阳性率在浸润癌、CIN各组明显高于正常宫颈组，差异均有统计学意义（P＜0.01），CIN和浸润癌各组无统计学差异（P＞0.05）。4．相关性分析结果证实，HR-HPV感染与p16INK4A表达呈密切相关（rs=0.572，P＜0.001），HR-HPV感染与PTEN表达无相关性（rs=-0.119，P=-0.171）。5．在宫颈上皮内低度病变-CINⅠ组，p16INK4A表达阳性率明显低于HR-HPV（P＜0.01）。6．在89例ASCUS中，组织病理证实HSIL（CINⅡ／Ⅲ）22例、宫颈癌2例，占26.97％（24／89）。7．在TCT-ASCUS中，p16INK4A表达阳性与组织病理证实的HSIL呈密切相关（rs=0.835，P=0.000），HR-HPV阳性与HSIL亦有相关性，但关系不够密切（rs=0.323，P=0.002）。8．p16INK4A免疫细胞化学染色对HSIL的阳性预测值（PPV）和特异性（Sp）分别为84.62％和93.85％，明显高于HC-2 HR-HPV DNA检测的PPV35.94％和Sp 36.92％。结论1．在HR-HPV感染的子宫颈癌和上皮内高度病变中，p16INK4A出现过表达，其表达强度反映了HR-HPV导致宫颈上皮恶性转化的程度。2．在子宫颈上皮癌变过程中PTEN表达缺失或低表达，而且与HR-HPV途径无关，提示宫颈癌的发生是多因素、多途径的。3．在TCT-ASCUS中，p16INK4A免疫细胞化学染色比HC-2 HR-HPV检测能够更准确地鉴别宫颈良、恶性疾病，同时避免了形态学诊断的主观性，有助于提高细胞学诊断技术。