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内生真菌(Endophytic fungi)是指那些在其整个或是部分生活史中寄居在健康植物各种组织和器官内部,不会对宿主造成明显病害症状的真菌。研究证明,内生真菌在与宿主植物长期共生和相互影响过程中,不仅能够促进宿主体内某些代谢产物的合成与积累,还可以产生与宿主植物相同或相似的生物活性成分。因此,作为具有潜在药用价值的一类特殊微生物资源,药用植物内生真菌已成为获取天然活性产物的重要来源。连翘Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl为木犀科连翘属多年生落叶灌木,主要分布在我国山西、陕西、河南等地,其干燥果实是我国临床传统中药,具有清热解毒、消肿散结等功效。现代药理研究表明,连翘具有广谱的抗病原微生物、抗炎、抗病毒、抗氧化、强心、保肝、利尿、镇痛止吐、解热等多种活性。本文对药用植物连翘中的内生真菌进行了初步研究,研究结果如下：(1)采用常规微生物分离纯化法从连翘茎、叶及果实中分离纯化得到24株内生真菌,其中,茎部9株,叶5株,果实10株,菌株编号分别为J1-J9, Y1-Y5, G1-G10。(2)采用滤纸片法测定内生真菌发酵产物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)26003、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) A99和大肠杆菌(Escherichia coli)A703种细菌的抑菌活性。测定结果表明,在24株内生真菌中,有20株菌株的发酵产物至少对1种供试细菌表现出抑制作用；抑菌圈直径超过10mm的活性菌株,发酵液组中有11株,菌丝体组中有19株,其中G5、G7和G10的抑菌活性较强。(3)采用TLC和HPLC从抑菌活性菌株中筛选产连翘苷内生真菌,进一步利用HPLC-MS检测活性菌株中连翘苷成分。TLC初筛结果显示,菌株G10的菌丝体提取物在与连翘苷标准品相同Rf值处出现相同颜色的斑点,HPLC复筛结果显示,G10的胞内产物在与连翘苷标准品的保留时间相同处出现一明显吸收峰,HPLC-MS检测中,G10产生的离子碎片峰与连翘苷标准品的分子离子峰一致,进一步表明菌株G10可以产生宿主活性成分连翘苷。(4)通过观察目的菌株的菌落形态和显微特征及其ITS序列分析,将菌株G10鉴定为炭疽菌属真菌胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides。(5)对菌株G10的液体发酵培养基成分及培养条件进行优化。通过几种常用真菌培养基的比较,选择利于菌丝体生长及活性成分积累的豆芽汁培养基作为菌株G10的最佳基础培养基；通过培养基成分的单因素分析,确定葡萄糖和酵母膏分别为菌株G10的最适C源和最适N源；进一步通过对液体发酵条件的正交优化,确定适于菌株G10菌丝体生长和连翘苷积累的最佳培养方式为:以豆芽汁培养基为基础,葡萄糖5.0%,酵母膏0.25%,pH6.0；比较优化前后G10的菌丝体干重和连翘苷含量,优化后培养基中二者分别增长了33.33%和19.15%。