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本论文研究采用Co60-γ射线辐射诱变、紫外诱变、航天卫星搭载诱变和离子注入诱变等方法对樟芝326菌株进行了物理诱变育种的研究。
樟芝经Co60-γ射线辐射后,随辐射剂量的增加,致死率逐渐升高。300Gy对樟芝菌丝片段进行诱变,可以获得较大的突变率。樟芝经紫外诱变后,随照射时间的延长,菌体死亡率逐渐增加。离子注入诱变和航天搭载诱变也都表现出了良好的诱变效果。
经拮抗试验和菌丝体培养试验共筛选出42个诱变菌株。加上本实验室保存的324、325两个菌株和出发菌株326,共计45个菌株进行进一步的筛选。
过氧化物酶和酯酶同工酶测定结果分析:两种同工酶的酶带清晰可见,45个樟芝菌株共检测到18条酶带,诱变效应明显。综合两种同工酶电泳的试验结果,对45个樟芝菌株进行系统聚类分析,在相似系数0.77的水平上,划分为4个群。
ISSR分析结果显示:用引物W2扩增后出现的大小为1.1Kb、2.3Kb1.7Kb、2.4Kb的条带基本都存在于经紫外诱变产生的菌株中,据此推断这些位点可能是樟芝的紫外诱变位点。用引物W2扩增后出现的1.3Kb、2.4Kb两个条带,用引物W5扩增后出现的大小为2.5Kb的条带,基本都存在于Co60-γ射线辐射诱变产生的菌株中,故推断这些位点可能受Co60-γ射线辐射诱变效应的影响较大,易发生突变。通过对45个樟芝菌株进行系统聚类分析,在相似系数0.77的水平上,划分为5个群。
选择具有代表性且培养性状良好的Lb、Zg、Gg、Zr、327以及324、325、326共计8个菌株进行液体发酵试验,以期筛选出多糖和三萜高产的优良菌株。
经液体发酵试验发现,参试的樟芝8个菌株在培养的前6d均处于对数生长期,第7-8d生长速度减缓,从第9-10d起开始出现菌丝自溶现象。327菌株为筛选出的多糖和蛋白质高产菌株,Gg为筛选出的三萜高产菌株,且它们与出发菌株326间均存在极显著的差异,物理诱变效应明显。