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在过往的组织工程研究中已经证实,由犬骨髓内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)和骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)共同构建的组织工程构建体可以有效地修复缺损和病变的组织。然而不同研究之间,疾病的病因、细胞移植的时机、移植的剂量、递送的途径和移植终点的选择不同,都可能导致不同的结果。因此细胞体外标记后完成的组织工程构建体应用于后期移植,可以帮助干细胞组织工程研究实现体内分化示踪,更好地了解干细胞的修复行为。目前国内在细胞体外标记技术的研究和应用领域已有许多成果,但是标记细胞应用于体内长期示踪的效果以及EPCs难以荧光标记的现状,还没有得到有效地解决方法。针对这些问题,本研究通过荧光染料和携带荧光蛋白基因的慢病毒转染EPCs和BMSCs,在保证细胞体内长期示踪要求的同时,克服荧光蛋白标记EPCs的难点;探究转染后RFP-EPCs和GFP-BMSCs的增殖活性;摸索制备人羊膜脱细胞基质的方法,利用组织学、扫描电镜等检测脱细胞羊膜基质的生物相容性,探究RFP-EPCs和GFP-BMSCs在脱细胞羊膜上生长的可行性,明确了组织化工程羊膜贴片的特性,得到试验结果如下:1.对比四种慢病毒介导的荧光蛋白基因转染犬骨髓EPCs的效率,筛选出以pLVX-mcherry-IRES-puro转染的EPCs,得到荧光标记阳性率达90%以上并可稳定遗传的RFP-EPCs;2.摸索出反复冻融-SDS-DNA酶法,制备得到无细胞残留、三维结构完整、柔韧性较强、生物相容性良好的人脱细胞羊膜基质,作为理想的组织工程支架材料;3.选用阳性率极高,荧光强度适宜的RFP-EPCs和GFP-BMSCs结合脱细胞羊膜基质,构建得到细胞增殖活性良好、贴附良好、混合生长分布均匀、可应用于体内修复示踪的组织工程化羊膜贴片。综上所述,本研究通过对比得到了能高效率转染犬骨髓EPCs的荧光蛋白基因pLVX-mcherry-IRES-puro和不影响其增殖活性的转染方案,同时得到转染率极高、荧光强度适宜的RFP-EPCs和GFP-BMSCs;结合“反复冻融-SDS-DNA酶”法制备的脱细胞羊膜基质,共同构建了增殖活性良好、贴附良好、混合生长分布均匀、可应用于体内修复示踪的组织工程化羊膜贴片。