产气荚膜梭菌（Cl. perfringens）是一种广泛分布于自然界中的条件性致病菌，其引起的家畜“猝死症”发病急，死亡快，发病率和死亡率高，给养殖业的发展带来了巨大的经济损失。α毒素是产气荚膜梭菌最重要的毒力因子，各型产气荚膜梭菌均可产生α毒素。目前，对家畜产气荚膜梭菌感染的诊断主要依赖于常规实验室诊断，但其操作过程复杂、耗时长，不适用于该疫病的防控。因此，建立一种针对α毒素快速准确的诊断方法，并能应用于现场的快速诊断是十分必要的。本实验首先采用分子生物学方法获得α毒素表达质粒；用该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，利用IPTG诱导表达，摸索最优表达条件；表达产物经SDS-PAGE电泳，获得大小为45KD的融合蛋白；在最佳条件下大量诱导表达目的蛋白，镍柱亲和纯化目的蛋白，Western blot检测表明目的蛋白具有良好的免疫学活性。用表达纯化后的α毒素蛋白作为抗原免疫家兔，四免后15d取血清获得多克隆抗体。经ELISA方法检测抗体效价可以达到1:512000，显示了良好的特异性。采用硫酸铵沉淀法和透析袋纯化抗体。胶体金免疫层析技术具有快速简便、准确直观等优点，具有良好的特异性和敏感性，是目前现场应用最广泛的一种诊断方法。本实验用抗产气荚膜梭菌α毒素多克隆抗体为探针制备了产气荚膜梭菌α毒素快速诊断金标试纸条。利用柠檬酸三钠还原法制备了粒径为40nm的胶体金，然后用其标记抗α毒素多克隆抗体喷涂金标垫，同时用纯化的α毒素多克隆抗体和羊抗兔IgG二抗包被M135硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线，与金标垫组装成试纸条。对试纸条的特异性、敏感性、稳定性和重复性进行检测。用制备的产气荚膜梭菌α毒素快速诊断金标试纸条对临床样品进行检测，并比较其与PCR检测结果的符合率。结果显示，成功制备了α毒素快速诊断金标试纸条，金标垫上最佳抗体包被量为1mg/mL；检测线上α毒素多克隆抗体最适印迹量约为600μg/mL；控制线上羊抗兔二抗的最佳包被浓度为1:20稀释；当α毒素质量浓度为2.80和1.40mg/mL时，检测线处有明显条带；当α毒素质量浓度为0.70mg/mL时检测线处条带较淡；当α毒素质量浓度为0.35mg/mL时，检测线处几乎没有条带，表明试纸条具有较好的敏感性和特异性；研制的试纸条仅与产气荚膜梭菌α毒素发生反应，且不同批次的试纸条重复检测结果无差异，表明试纸条具有较高的特异性和重复性；该试纸条最低可检测1.40mg/mL的毒素量，与PCR方法的符合率为80.00%，基本能满足要求，具有良好的应用前景。