草酸青霉分泌的纤维素酶组分比瑞氏木霉的更丰富、合理,在生物炼制领域已起到重要作用。纤维素酶基因的表达和酶的分泌是一个多水平且复杂的过程,而分泌途径中的翻译后加工也是其高产的瓶颈之一。因此,研究分泌途径相关基因的功能及其对纤维素酶分泌的影响,对于提高纤维素酶产量具有重要意义。本课题以自主分离筛选的草酸青霉(Penicillium oxalicum)菌株HP7-1为研究材料,首先,敲除了非同源末端重组途径关键基因PoligD(△PoligD),提高了草酸青霉基因打靶效率(达到96%),利于基因功能研究。其次,验证了PoagaA基因作为营养缺陷型筛选标记在P.oxalicum遗传转化中的应用。最后,克隆鉴定了 P.oxalicum分泌途径液泡蛋白分拣基因PoVTA1,敲除PoVTA1(△PoVTA1)造成菌丝生长和产孢的严重缺陷。PoVta1p定位于草酸青霉HP7-1菌株细胞质中,在Avicel诱导纤维素酶条件下,敲除PoVTA1草酸青霉蛋白的分泌量增加了 50%;△PoVTA1菌株胞内外纤维素酶酶活力与半纤维素酶酶活力均明显升高。在可溶性淀粉发酵培养基中,敲除PoVTA1也能促进草酸青霉蛋白的分泌量(提高了 30%);△PoVTA1胞外的可溶性淀粉酶和生木薯粉酶酶活较对照菌的分别提高了 1.9倍和2.1倍。这说明PoVta1p可能直接参与了纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶从高尔基体到液泡的运输过程。本课题为研究PoVta1p在木质纤维素降解酶和淀粉酶分泌过程的作用机制奠定了重要基础,为改造分泌途径提高青霉菌株分泌蛋白产量提供理论指导。