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CA19-9是一种糖蛋白,在胰腺癌、胆道癌、结肠癌、胃癌等恶性肿瘤患者体内高水平表达,因此检测CA19-9的含量可以对相关恶性肿瘤进行早期筛查及辅助诊断。目前,临床上针对CA19-9的检测方法有许多,随着国家分级诊疗制度的建设,急需适用于基层医疗单位的床旁快速检测方法。随着体外诊断技术的快速发展,荧光免疫层析技术现已成为床旁快速检测的重要手段之一。基于此,本研究拟建立一种新型荧光免疫层析定量检测CA19-9的方法。主要采用杂交瘤技术制备CA19-9单克隆抗体,筛选出符合要求的CA19-9配对单克隆抗体用于荧光免疫层析检测方法的建立。在此基础上,利用荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球为标记物,NC膜为载体,将筛选的CA19-9配对抗体分别进行标记和包被,并对试纸条制备过程中的主要原材料进行筛选,对工艺、最佳反应时间进行优化,制备定量检测血清中CA19-9的荧光免疫层析检测试纸条。通过对试纸条的线性范围、精密性、特异性等性能指标进行检测比对,以评价本研究建立的CA19-9荧光免疫层析定量检测方法。本研究筛选得到2对较优的CA19-9单克隆抗体配对组合,利用荧光免疫层析法进行进一步的应用筛选,其中以M-2E3、M-2D8作为配对抗体制备的试纸条的性能最优。经工艺优化,试纸条最佳检测时间为15min,得到的线性方程为y=0.0069x+0.0223,R~2=0.9865,检测线性范围为12.5-800 U/mL;最低检出限为9.74 U/mL,批内变异系数与批间变异系数均小于15%,平均回收率为101%;试纸条37℃加速破坏24天稳定性良好,与罗氏CA19-9试剂盒(电化学发光法)平行检测50份临床样本,R~2=0.9886,回归方程为y=0.9884x+3.8191,相关性良好。本研究成功制备了适用于荧光免疫层析检测方法的CA19-9配对单克隆抗体,初步建立了定量检测血清中CA19-9的荧光免疫层析检测方法,有较好的临床应用前景。