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目的喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cancer,LSC)是呼吸道常见的恶性肿瘤之一,具有高发病率的特点。因此,研究喉癌的发生发展的分子机制,对提高喉癌治疗疗效有重要意义。高迁移率族蛋白2(high mobility group A,HMGA2)是一种非组蛋白的染色体蛋白,在许多肿瘤中高表达,并且与肿瘤的预后有重要的关系,但在喉癌中的作用尚不清楚。microRNA是一类非编码的小RNA,let-7a是其中一员,通过与靶向基因3,非编码区(3,UTR)结合抑制靶标基因的转录或翻译,从而达到调控基因表达的作用。在喉癌中尚未见到let-7a对HMGA2调控机制的相关研究。在本次研究中,我们在前期研究的基础上,通过合成let-7a模拟体(let-7a mimics)转染喉癌细胞株(Hep-2)模拟喉癌细胞内let-7a的高表达水平,探讨喉癌细胞内let-7a升高后对高迁移率族蛋白的影响,以及对喉癌细胞增殖的影响。方法1.合成let-7a mimics并瞬时转染喉癌细胞株(Hep-2),检测喉癌细胞的转染率。2.将成功转染的细胞培养后进行实时荧光PCR(Real-time qPCR),检测转染后细胞内let-7a表达水平。3.再行Real-time qPCR和蛋白印迹(western blot)检测喉癌细胞株Hep-2中let-7a高表达后对HMGA2转录、表达的影响。4.通过流式细胞术检测喉癌细胞株Hep-2中let-7a高表达对喉癌细胞凋亡的影响。结果1.喉癌细胞株(Hep-2)成功转染let-7a后,Real-time qPCR检测提示空白对照组和阴性对照组(negative control,NC)的let-7a mRNA的表达水平明显低于实验组,差异有统计学意义(P<0.05);空白对照组与NC组之间的差异不具有统计学意义(P>0.05)。2.喉癌细胞株(Hep-2)成功转染let-7a后,Real-time qPCR检测提示空白对照组和NC组的HMGA2 mRNA的表达水平明显高于实验组,差异有统计学意义(P<0.05);空白对照组与NC组之间的差异不具有统计学意义(P>0.05)。3.喉癌细胞株(Hep-2)成功转染let-7a后,行western blot检测提示空白对照组、阴性对照组平均灰度值分明显高于实验组,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组与NC组之间的差异不具有统计学意义(P>0.05)。4.流式细胞技术检测Hep-2细胞转染let-7a mimics和let-7a mimics NC24小时后的细胞凋亡情况。结果显示,Hep-2细胞在转染let-7a mimics后凋亡增加,结果有统计学意义(P<0.05)。结论(1)通过转染let-7a mimics上调Hep-2细胞内let-7a的表达水平,let-7a在转录和翻译水平抑制了HMGA2的表达。HMGA2可能是let-7a的靶基因。(2)上调喉癌细胞内let-7a的表达会抑制喉癌细胞的增值,促进喉癌细胞的凋亡。