生命遭遇高温，缺氧，H2O2等环境胁迫时机体会发生应激反应，合成一系列高度保守的热激蛋白，其中HSP70是最保守，最重要的一类，其对机体的保护作用是受多种因子调控的，包括共伴侣分子，核苷酸交换因子等。Feslp是人HSPBP1的同源物，存在于酵母细胞质中，是Ssalp和Ssblp的核苷酸交换因子(NEF)。以野生型酵母细胞为对照，Feslp的缺失会导致酵母细胞在37℃下不能正常生长；突变体不影响变性萤光素酶的复性，而HSPBP1抑制萤光素酶再折叠，从而影响其复性。At3909350的突变体Salk_021784和野生型拟南芥38℃预处理2h，45℃热处理4h后，室温(25℃)恢复一周，观察表型恢复情况，发现突变体基本全部枯黄，而野生型恢复良好，能够继续生长。推测该突变蛋白可能与植物的耐热性有关。通过蛋白质序列及结构分析，At3909350所表达的蛋白可能是Feslp的同源物，为此，本研究命名其为Feslp类蛋白(AtFeslp)，该蛋白具有ARM重复结构域。 为了研究AtFeslp在热敏感反应中是否具有重要的地位与作用，是否具有和Feslp类似的调控机能，AtFeslp与HSP70是否具有蛋白质-蛋白质相互作用，本论文利用原核表达系统等表达纯化了GST-AtFeslp、DnaJ、HSP70和GST-AtFeslp-truncate蛋白，制备了AtFeslp的多克隆抗体，同时利用免疫共沉淀技术，GST-Pull down技术进行鉴定，结果表明AtFeslp与HSP70具有分子间相互作用，在拟南芥耐热性中具有重要作用。本实验主要结果如下： 1、拟南芥突变体T-DNA插入子鉴定。 CTAB小量法提取拟南芥突变体基因组，PCR扩增目的片断，装入pGEM-TEasy载体，测序。测序结果表明，Salk_021784，Salk_113165为At3909350的突变体，而Salk_143747不属于At3953800的突变体。 2、GST-AtFeslp多克隆抗体的制备。 纯化GST-AtFeslp融合蛋白，免疫新西兰雄性白兔，制备GST-AtFeslp多克隆抗体，从而能够进一步鉴定AtFeslp与HSP70的体内（in vivo）和体外（in vitro)蛋白质互作情况，以及AtFeslp在突变体和野生型拟南芥中不同条件下的表达情况。 3、AtFeslp和HSP70具有蛋白质-蛋白质相互作用。 以GST-AtFeslp多克隆抗体为“诱饵”，对突变体Salk_021784和野生型拟南芥免疫共沉淀（in vivo），Western-blotting结果表明，在38℃和常温(25℃)下野生型拟南芥中都可以检测到HSP70与AtFeslp的结合，而突变体Salk_021784检测不到这种互作；以提取纯化的玉米HSP70和原核表达的GST-AtFeslp融合蛋白或GST蛋白分别为“诱饵蛋白”和“靶蛋白”，不同条件下的GST-Pulldown实验（in vitro）结果表明，HSP70和GST-AtFeslp融合蛋白的结合不受到或很少受到温度、KCl和DnaJ的影响，说明二者的相互作用具有特异性，且结合比较紧密。由此推测AtFeslp在热敏感反应中具有重要的作用，是植物高温下的生长所必需的基因。 4、AtFeslp具有分子伴侣活性。 萤火虫萤光素酶40℃热变性10min后，加入HSP70和GST-AtFeslp融合蛋白30℃复性1h，分别测其0min，30min，60min时的荧光素酶活性，数据表明GST-AtFeslp融合蛋白对萤光素酶的复性具有促进作用，说明AtFeslp具有分子伴侣活性。