子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，近年来随着子宫颈人乳头状瘤病毒(HPV)感染发病率的升高，子宫颈癌的发病率呈上升趋势，高发年龄趋于年轻化，成为严重危害妇女健康的疾病。β-谷甾醇是一种植物固醇，多个在体和离体实验已证实β-谷甾醇对结肠癌、前列腺癌和乳腺癌有保护作用，我院于上世纪七十年代曾单独外用β-谷甾醇栓片治疗115例子宫颈癌，有效率达75-65％，但对该药的药理机制未进行过深入研究。本文旨在研究β-谷甾醇对子宫颈癌细胞的增殖抑制作用及其可能的作用机制，以期寻求一种新的子宫颈病变的治疗选择。本论文共分三部分：1．β-谷甾醇对子宫颈癌细胞株生物学行为的影响；2．β-谷甾醇对子宫颈鳞癌细胞株SiHa细胞微管系统的影响；3．β-谷甾醇对SiHa细胞干扰素(IFN)及其下游基因的作用。第一部分β-谷甾醇对子宫颈癌细胞株细胞生物学行为的影响目的了解β-谷甾醇对子宫颈癌细胞形态学、增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法在子宫颈癌细胞SiHa／HeLa的培养基中加入不同浓度的β-谷甾醇和／或掌叶半夏总蛋白，采用MTT比色法检测不同浓度β-谷甾醇对SiHa／HeLa细胞增殖的影响。采用倒置相差显微镜、扫描和透射电镜、流式细胞术检测SiHa细胞经20umol／L的β-谷甾醇处理不同时间，细胞形态学和超微结构的变化，及β-谷甾醇对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果β-谷甾醇能抑制子宫颈癌细胞SiHa／HeLa的增殖，且具有时间、剂量依赖关系，β-谷甾醇对SiHa的生长抑制作用较强，掌叶半夏总蛋白对SiHa细胞的生长无显著影响。与对照组比较，20umol／L的β-谷甾醇使SiHa细胞出现S期阻滞，凋亡和坏死细胞增加，细胞形态和超微结构发生显著改变。结论β-谷甾醇能抑制人子宫颈癌细胞增殖，对子宫颈鳞癌细胞株的抑制作用大于子宫颈腺癌，使细胞周期阻滞在S期。第二部分β-谷甾醇对子宫颈癌细胞SiHa微管系统的影响目的探讨β-谷甾醇对子宫颈癌细胞SiHa细胞内微管系统的影响。方法应用激光共聚焦显微技术观察β-谷甾醇处理的SiHa细胞内微管和微管相关蛋白2的表达、分布，采用蛋白免疫印迹法检测微管蛋白、微管相关蛋白2的表达，及聚合和未聚合微管蛋白含量的变化。结果激光共聚焦分析表明，20umol／L的β-谷甾醇作用5天的SiHa细胞微管网络异常，微管相关蛋白2表达显著下调，蛋白免疫印迹结果进一步证实β-谷甾醇能抑制微管蛋白α和微管相关蛋白2的表达，同时β-谷甾醇能抑制SiHa细胞内微管蛋白的聚合，并随着作用时间的延长而逐渐增强。结论β-谷甾醇能降低SiHa细胞微管蛋白α和微管相关蛋白2的表达，并抑制SiHa细胞内微管的聚合，提示β-谷甾醇具有一定的抗微管作用，这一作用可能是造成SiHa细胞生长抑制的重要原因。第三部分β-谷甾醇对子宫颈癌细胞株SiHa干扰素及其下游基因的作用目的探讨β-谷甾醇对子宫颈癌细胞SiHa细胞内源性干扰素及其下游基因和HPV E7蛋白表达的影响。方法采用RT-PCR法检测β-谷甾醇作用于SiHa细胞不同时间后，IFNα、IFNβ、ISG15、OAS(p39／41)、OAS(p69／71)、RNase L、MxA、PKR基因mRNA的表达变化。采用western blot法检测β-谷甾醇作用于SiHa细胞不同时间后STATl和HPV E6、E7蛋白的表达水平。结果RT-PCR结果表明20umol／Lβ-谷甾醇作用于SiHa细胞3天和5天后，IFNp、ISGl5、OAS(p40／46)、OAS(p69／71)和MxA的mRNA表达水平显著增加(P＜0.01)，并具有时间依赖效应：而RNase L、PKR的mRNA水平在药物作用前后没有明显的变化。western blot结果显示药物作用3天和5天后，STAT1蛋白表达水平显著增加，E7蛋白的表达水平在药物作用第一天即显著下降。结论β-谷甾醇可诱导IFNβ及下游系列基因的mRNA表达水平增加，这些基因表达产物可能直接或间接参与β-谷甾醇对SiHa细胞的作用，引起SiHa细胞生长抑制，同时β-谷甾醇降调了E7蛋白表达，该作用可能是β-谷甾醇的直接引起或是IFN及其下游基因产物抗病毒作用的结果。