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干旱、低温和高盐是严重影响作物生长发育及产量的环境胁迫因子。许多研究表明LbGRP(glycine-rich RNA-binding protein)基因在植物的抗寒和抗盐胁迫过程中发挥着重要的作用。本研究从二色补血草(Limonium bicolor)中克隆得到的LbGRP基因。首先,研究了该基因在不同胁迫下在二色补血草茎、叶中的表达情况。然后将该基因构建到酵母表达载体pYES2中,对其进行酿酒酵母的遗传转化;并对重组酵母进行不同逆境胁迫,以验证二色补血草LbGRP基因的抗逆性;为了深入研究LbGRP基因的功能,利用农杆菌介导法将LbGRP基因导入烟草基因组中,通过对转基因烟草的盐碱胁迫试验,对LbGRP基因进行进一步的功能验证。主要研究结果如下:(1)克隆了二色补血草LbGRP基因的全长cDNA序列,并研究了该基因在不同胁迫下在二色补血草根、叶中的表达情况。用实时定量RT-PCR方法检测该基因对低温、NaCl、KCl、NaHCO3、Na2CO3和聚二乙醇(PEG)胁迫的基因表达模式的结果表明,低温能诱导LbGRP基因在二色补血草根和叶中表达,而在NaCl胁迫下,LbGRP基因在二色补血草根和叶中表达均受抑制。(2)将LbGRP基因与酵母表达载体pYES2连接,获得了pYES2-LbGRP重组质粒,并将其转化到酿酒酵母INVSc1菌株中,获得重组酵母INVSc1(pYES2-LbGRP)。对INVSc1(pYES2-LbGRP)和对照菌株进行半乳糖诱导,以研究外源基因LbGRP在酵母中的的表达情况;Northern杂交结果表明,INVSc1(pYES2-LbGRP)重组酵母经诱导后能够表达外源LbLbGRP基因。(3)对重组酵母INVSc1(pYES2-LbGRP)进行了NaCl、KCl、Na2CO3、NaHCO3、PEG和低温胁迫处理,处理结果证实INVSc1(pYES2-LbGRP)酵母的抗逆性明显高于对照INVSc1(pYES2)菌株;初步认为重组酵母处于逆境胁迫时,通过LbGRP基因的表达,增强了酵母对逆境的耐受能力。(4)采用根癌农杆菌介导的转化法对烟草进行遗传转化,共获得20株卡那霉素抗性芽,对其中9株进行PCR检测,结果9株全部为阳性转基因植株;进一步进行Northern杂交检测,结果表明外源基因能够在烟草中表达。(5)对5个转基因株系进行了NaCl胁迫处理,分析了逆境胁迫条件下转基因烟草与非转基因对照的丙二醛(MDA)含量、过氧化物酶(POD)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、脯氨酸含量和可溶性蛋白等指标的变化。结果表明:NaCl胁迫处理后,转基因株系的POD活性、SOD活性、CAT活性、可溶性蛋白含量均较非转基因植物有所提高,5个株系中B14株系表现更佳。综合以上结果,LbGRP基因的表达能够不同程度提高转基因烟草逆境胁迫下的耐受能力,证实LbGRP基因具有提高植物耐盐性的功能;同时综合各个转基因株系几项生理指标的变化,认为转基因株系14号对盐碱胁迫的抗性更强,是理想的耐逆株系。