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第一部分Dusp1在胆囊癌及胆囊正常组织中的表达目的观察双特异性磷酸酶1(Dusp1)在胆囊癌组织及正常胆囊组织中的表达量,初步探讨Dusp1在胆囊癌发生中的作用。方法Dusp1免疫组织化学染色,检测47例临床胆囊癌及25例正常胆囊组织标本,研究Dusp1在胆囊癌组织及正常胆囊组织中的表达情况,比较在癌组织和正常组织中；高度恶性胆囊癌与低度恶性胆囊癌组织中Dusp1的含量差异。结果Dusp1在胆囊癌组织主要表达量强弱不一,以阴性和弱阳性表达居多(51.1%),中等阳性表达次之(31.9%)；少部分为强阳性表达(18%)；在正常胆囊组织中主要是中等阳性(40%)和强阳性表达为主(32%)；部分呈弱阳性表达(28%)。总体上胆囊癌组织中Dusp1表达量低于正常组织中,Dusp1在高度恶性胆囊癌组患者的肿瘤组织中表达量低于低度恶性组的肿瘤组织。结论与正常胆囊组织相比,Dusp1在胆囊癌组织中呈下调性表达；随着肿瘤侵袭性增强,Dusp1表达量降低,初步提示Dusp1在胆囊癌中可能起抑制肿瘤进展的作用。第二部分Duspl对胆囊癌增殖和克隆形成能力的影响目的研究Dusp1对胆囊癌增殖和克隆形成能力的影响。方法运用慢病毒载体系统,在胆囊癌细胞系GBC-SD和SGC996中构建Dusp1敲减及过表达细胞系。通过MTS细胞增殖实验和克隆形成实验,检测在胆囊癌细胞中Dusp1敲减以及Duspl过表达对细胞增殖和克隆形成能力的影响。同时,构建裸鼠皮下成瘤模型,在动物体内研究SGC996细胞中过表达Dusp1时对肿瘤增殖能力的影响。结果运用慢病毒载体系统,在Dusp1含量相对较高的GBC-SD细胞中构建了Dusp1敲减细胞系,在GBC-SD和SGC996中构建Duspl过表达细胞系,并通过Real-timePCR和Western Blot方法进行验证病毒感染效率。在GBC-SD细胞中敲减Dusp1,细胞增殖和克隆形成能力增强。在SGC996和GBC-SD细胞中过表达Dusp1,细胞增殖和克隆形成能力均减弱。进一步的机制研究显示Dusp1敲减细胞中pERK含量升高,Duspl过表达细胞中pERK含量降低,Dusp1可能通过降低pERK表达量抑制细胞增殖；在裸鼠皮下成瘤模型中,将Dusp1过表达的SGC996细胞与其对照组细胞各接种到6只裸鼠皮下,约10天后实验组和对照组裸鼠均成瘤,观察20天后,Dusp1过表达时裸鼠皮下肿瘤的体积与重量小于对照组肿瘤,肿瘤免疫组化结果提示Dusp1过表达肿瘤组织中pERK表达量降低。结论Dusp1能抑制胆囊癌增殖和克隆形成能力,这一功能可能通过负向调控pERK表达量实现。第三部分Dusp1对胆囊癌侵袭转移和血管形成能力的影响目的研究Dusp1对胆囊癌侵袭转移和血管形成能力的影响。方法运用慢病毒载体系统,在胆囊癌细胞系GBC-SD和SGC996中构建Dusp1敲减及过表达细胞系。通过细胞划痕实验,transwell迁移及侵袭实验,分别检测Dusp1敲减或过表达对细胞迁移/侵袭能力的影响。动物实验通过上述两组细胞分别接种到10只裸鼠皮下,在动物体内研究Dusp1对胆囊癌侵袭转移能力的影响,进一步观察了肿瘤血管形成情况。结果运用慢病毒载体系统,在胆囊癌细胞系GBC-SD和SGC996中构建Dusp1敲减及过表达细胞系。并通过Real-time PCR和Western Blot方法验证病毒感染效率。细胞划痕,迁移及侵袭实验显示,在GBC-SD细胞中敲减Dusp1,促进了GBC-SD的迁移和侵袭。在SGC996和GBC-SD细胞中过表达Dusp1,抑制了细胞的迁移和侵袭。进一步的研究提示Dusp1可能通过Dusp1-pERK-MMP2抑制胆囊癌细胞的侵袭能力。在裸鼠皮下转移瘤模型中,将Dusp1过表达的SGC996细胞与其对照组细胞分别接种到10只裸鼠皮下,一个月后解剖观察肿瘤转移情况。在Dusp1过表达组中有一只裸鼠发生转移,对照组3只裸鼠发生转移；Dusp1在体内实验中也抑制了胆囊癌的转移。观察裸鼠皮下肿瘤的血管形成情况及CD31免疫组化染色结果提示Dusp1抑制肿瘤血管形成,进一步机制研究发现Dusp1可能通过Dusp1-pERK-VEGFA通路抑制胆囊癌的肿瘤血管形成。结论Dusp1抑制了胆囊癌的侵袭转移和血管形成能力,进一步的机制研究提示可能分别通过Dusp1-pERK-MMP2和Dusp1-pERK-VEGFA通路抑制侵袭转移和血管形成。