诱变处理筛选纤维素酶高产菌株及发酵条件优化

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用紫外线照射的方法对出发菌株--斜卧青霉(Penicillium decumbens)A10进行处理后,从中筛选到了一株产纤维素酶活力比较高的A-135菌株,传代10次后纤维素酶产酶能力的稳定性仍然保持良好。再用能量为30keV,剂量5×1015 N+/cm2的N+注入A-135菌株,获得一株高产K79菌株,在培养基未优化条件下,发酵液的滤纸酶活由出发菌株的25.5 IU/mL提高到40.8 IU/mL,较出发菌株的滤纸酶活提高了60%,并表现出良好的稳定性。对产酶较高的K79发酵产酶培养基中的主要成分麸皮、蛋白胨、表面活性剂、抗坏血酸盐等的添加量进行了单因子研究试验,并对这四个因子进行正交试验,获得了优化的产酶培养基,其配方如下:2%麸皮、3%玉米秸秆粉、0.3%KH2PO4、0.2% (NH4)2SO4、0.05% CO(NH2)2、0.05% MgSO4、0.5% CaCO3、蛋白胨0.1%、表面活性剂吐温80 0.015mL/100mL、抗坏血酸盐0.01%。此时K79菌株的滤纸酶活水平达55.5 IU/mL。对K79菌株发酵产酶过程中不同发酵温度、不同起始发酵pH、不同通气量等进行了研究,确定了32℃、pH6.8、250mL摇瓶装瓶量30mL为K79菌株摇瓶发酵产酶的最适培养条件。K79菌株和出发菌株A10的纤维素酶种类基本相同,均可产生CMCase和FPA活性,且活力均有所提高。出发菌株A10的纤维素酶最适作用pH是5.4;K79菌株纤维素酶的最适作用pH是6.0。出发菌株A10在pH 7.0到10.0之间纤维素酶的稳定性较好,而K79菌株在pH 6.0到10.0之间纤维素酶的稳定性较好。K79菌株和A10菌株的纤维素酶最适作用温度均为52℃;在20℃到50℃之间K79菌株和出发菌株A10纤维素酶稳定性比较好,二者的半失活温度都在55℃左右。
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