香蕉(Musa spp.)针晶体内蛋白N-末端短肽促进草酸钙结晶的动力学研究

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草酸钙晶体普遍存在于各种高等植物体内。不同的植物草酸钙晶体呈现出方晶、柱晶、和针晶等不同的特定形态,说明草酸钙晶体的形成是受到生物大分子的调控。研究发现香蕉植物体内的草酸钙针晶体内存在14kDa蛋白,它自组装形成纳米丝,模板诱导草酸钙针晶体的形成。本研究通过体外合成针内14kDa蛋白N-末端的含11个氨基酸短肽(MENLTASEIAG)片段(11-mer MG),结合体相成核和原位原子力显微镜(AFM)下草酸钙表面生长动力学的研究,系统调查了N-末端短肽对一水合草酸钙(COM)晶体体相成核及表面生长的影响,主要结果如下:(1)为研究COM表面生长,首先借助凝胶法(硅酸钠水凝胶和膨润土胶两种介质)合成了适合在AFM下观察的COM晶体。结果表明,用硅酸钠水凝胶合成了簇状透明晶体。在实验温度为50°C,反应物K2C2O4和Ca(NO32浓度均为0.75 mol·L-1,培养30 d条件下,生长出了较大的(010)面(长约为1000μm,宽约为137μm)。但AFM实验表明,晶体表面生长紊乱且无法找到用于表面生长的螺旋,因此不适合用于AFM下表面动力学实验。而膨润土胶中合成的晶体,呈现不透明的灰色。在实验温度为62°C,反应物K2C2O4和CaCl2浓度均为0.75mol·L-1,培养60 d后,COM晶体的(010)面长约为522μm,宽约为250μm。在同样的实验体系中,添加20 g NaCl到膨润土胶中,COM晶体的(-101)面较大(长约为815μm,宽约为268μm)。AFM实验表明,膨润土胶中合成晶体均能在(010)面和(-101)面找到适用于表面生长的螺旋。(2)在NaCl和KCl两种背景电解质存在时,研究了11-mer MG肽段对COM体相成核的影响,实验结果表明:无论何种背景电解质,加入不同浓度11-mer MG肽段均能促进COM成核,但不同多肽浓度间无显著差异。NaCl为背景电解质下成核诱导时间显著高于KCl体系,最终COM晶体呈规则的六边形。而在KCl体系中,形成的COM晶体呈现菱形,表明存在KCl和11-mer MG对COM成核具有明显的促进作用。(3)借助原位AFM在纳米尺度下,研究了11-mer MG肽段对COM表面生长的影响,结果表明,在不同过饱和度下(σ=0.266,σ=0.508,σ=0.816),不同浓度的11-mer MG肽段,均促进了(010)面和(-101)面台阶的移动速度,其中在(010)面,σ=0.266,短肽浓度为1 nM时,促进效果最强,表现为[0-2-1]方向台阶移动速度增加了1.8倍,[100]方向台阶移动速度增加了1倍,表明在低过饱和度下,低浓度的11-mer MG肽段对COM表面生长促进效果更明显,而这种现象的产生可能是由于吸附在台阶上的11-mer MG肽段使台阶局部过饱和度升高,晶体表面去溶剂化度提高或溶质离子粘附到晶格上的活化能降低等,从而提高了台阶生长速度。
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