三种褐藻中岩藻聚糖硫酸酯的纯化及结构分析

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多肋藻、日本真海带与厚叶解曼藻是具有较高经济价值的三种褐藻,岩藻聚糖硫酸酯(Fucoidan)也称褐藻多糖硫酸酯、褐藻糖胶,主要存在于多种褐藻中,是一种水溶性的硫酸杂多糖,具有多种生物活性,是海洋生物活性物质的研究热点。本研究以此三种褐藻为原料,用DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换层析分离纯化岩藻聚糖硫酸酯,分别得到4、3、4种组分。对各组分的总糖、硫酸基、岩藻聚糖硫酸酯含量进行了测定和对比;并对比分析了其分子结构。通过对多肋藻、日本真海带和厚叶解曼藻进行复合酶解提取,乙醇分级沉淀法纯化,制备得到岩藻聚糖硫酸酯产品CF、SF和KF;利用DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换层析对岩藻聚糖硫酸酯进行分离纯化。多肋藻经分离纯化得到四个组分CF1、CF2、CF3和CF4,多糖组分主要集中在盐洗脱部分,其得率分别为2.81%、27.55%、11.44%、23.48%,CF2为低硫组分,其硫酸基含量为1.01%,CF4为高硫组分,硫酸基含量为16.12%;日本真海带经分离纯化得到三个组分SF1、SF2以及SF3,多糖组分也主要集中在盐洗脱部分,得率分别为12.95%、63.71%、15.70%,其中SF2为低硫组分,其硫酸基含量为5.56%,SF3为高硫组分,硫酸基含量达高达27.08%;厚叶解曼藻经分离纯化得到四个组分KF1、KF2、KF3以及KF4,多糖组分全部集中在盐洗脱部分,各组分分别占组分总量的4.41%、18.98%、4.04%、57.45%,其中KF1为低硫组分,其硫酸基含量为4.27%,KF4为高硫组分,硫酸基含量达高达29.31%。经Sephadex G200凝胶柱分离可知,真海带和厚叶解曼藻所得组分SF1、SF2、SF3、KF1、KF2、KF3和KF4组成单一,分子量分别约为48KD、146KD、155KD,136KD、136KD、119KD、104KD;多肋藻所得组分CF1、CF2和CF4的分子量约为52KD、5KD和94KD,其中CF3经凝胶柱层析分离后得到两个峰,即CF3-1和CF3-2,表明CF3组分纯化程度较差,两个组分分子量约为103KD和5KD。对11个组分进行气相色谱、红外光谱以及核磁共振波谱分析。经气相色谱分析各个组分的单糖组成,结果表明:其中9个组分主要是由岩藻糖、半乳糖、甘露糖及少量的木糖、葡萄糖五种单糖组成,单糖组成与大多数褐藻相似,真海带SF3及厚叶解曼藻KF4单糖组成单一,仅含岩藻糖(100%);三种褐藻中,硫酸基含量及岩藻糖含量最高的均为CF4、SF3、KF4。经红外光谱分析,结果表明:3450-3300cm-1附近出现的O-H伸缩振动峰,是糖类共有的;2935cm﹣1附近的是C-H伸缩振动峰,是岩藻糖中甲基的吸收峰;1250cm﹣1附近有强吸收峰,是硫酸基(S=O)的吸收峰,证明11个组分均是含有硫酸基取代的多糖;通过C-O-S伸缩振动的不同吸收位置(845cm﹣1、820cm-1),确定各个组分的硫酸基取代位置分别为:SF3、KF2、KF3和KF4的硫酸基在岩藻糖和半乳糖的C4位;CF1、CF2、CF3、SF2的硫酸基在岩藻糖的C2和C3位及半乳糖的C6位;CF4、SF1、KF1的硫酸基在岩藻糖的C2、C3、C4位,以及半乳糖的C4、C6;CF2、SF2在880cm-1附近有吸收峰,端基碳构型可能是β-D-吡喃糖;CF4、SF1、SF3、KF1、KF2、KF3和KF4在850cm-1附近有吸收峰,端基碳构型可能是α-型吡喃糖。经核磁共振波谱分析,结果表明:氢谱中高场区(1.2ppm左右)有很多甲基峰,可能没有氨基糖;碳谱分析表明100-105ppm是C1的位移,69-73ppm是C2-C5的位移,17-18ppm是C6的位移,74-83ppm硫酸基或糖基化的位移。
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