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食管腺癌主要发生在食管下段，其发病与慢性反流性食管黏膜损伤以及随后食管黏膜发生柱状上皮化生(Barrett’s食管)有关。目前其发病率在世界范围内有日益上升的趋势，尤其是在西方发达国家，食管腺癌已成为发病率上升速度最快的恶性肿瘤。食管腺癌预后极差，5年生存率只有13％-15％，而且在近10年中并无显著改善，这意味着发展食管腺癌化学预防策略的重要性。人Barrett’s食管、食管腺癌组织中存在着环氧合酶-2(COX-2)的过度表达。新近问世的新一代非甾体类抗炎药(NSAIDs)塞来昔布对COX-2具有选择性抑制作用，现己临床应用于家族性腺瘤样息肉病患者以预防结直肠腺癌的发生。因此塞来昔布可能也具有化学预防食管腺癌的潜力。 [目的]在大鼠酸和十二指肠液混合反流动物模型的基础上，通过体内和体外的途径，对选择性COX-2抑制剂塞来昔布用于食管腺癌化学预防的可行性进行实验性探讨。 [方法]1．大鼠混合反流动物模型的建立和COX-2表达的免疫组化检测。6周龄雄性SD大鼠80只，随机分为反流模型组(n=60)第，军医大李博士学位论文和无反流组(n=20)，术前适应环境2周。通过胃空肠吻合十食管空肠吻合术建立大鼠酸和十二指肠液混合反流动物模型，无反流组仅行单纯剖腹术。术后28周取食管全长，纵向剖开，肉眼观察病变，如发现肿瘤，则测量其最大三维尺寸，包括:宽度、从勃膜到外表面的深度和纵向跨度。于模型组和无反流组各随机选取8例食管标本，纵向切取2条各宽约lrnrn的食管组织(如有肿瘤或化生表现，应包含肿瘤或化生组织)于液氮中速冻后冻存于一70oC冰箱，以备检测环氧合酶一1(COX一l)和COX一2表达以及前列腺素E:(PGEZ)含量。将剩余食管组织标本制成石蜡切片，苏木精-伊红染色后行病理组织学检查，同时行免疫组化染色检测COX一2的表达。2.大鼠Barrett’s食管体外器官培养实验。选取模型组具有典型Barrett’S食管外观的标本，通过吻合口缝线判断吻合口位置，将吻合口食管侧1~以远的组织切除，然后仔细剥离食管下端形状不规则的淡红色勃膜，纵行切取少量剥离的豁膜组织行病理组织学检查以确认Barrett’s食管，剩余Barrett’s勃膜组织于体外进行24h器官培养。分别观察其暴露于酸、胆盐、塞来昔布、酸+塞来昔布和胆盐+塞来昔布lh对其组织活力以及COX一2和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。通过培养液乳酸脱氢酶(LDH)检测反映器官培养组织的损伤程度，采用westem Blotting检测COx一2和PCNA蛋白表达。3.大鼠食管腺癌体外细胞培养实验。将取自模型组大鼠的食管腺癌组织消化后于体外进行细胞培养。首先通过免疫组化染色检测其COX一2表达，然后通过MTT试验和流式细胞仪分别观察塞来昔布对大鼠食管腺癌细胞生长和凋亡的影响。4.塞来昔布用于食管腺癌化学预防的体内实验。6周龄雄性SD大鼠60只，术前适应环境2周，通过胃空肠吻合+食管空肠吻合术建立混合反流动物模型。术后2周，将大鼠标准鼠料换为塞来昔布加药鼠料，此组大鼠为塞来昔布处理组，结果与模型组和无反流组进行比较。术后28周取食管全长，肉眼观察病变，第.军医大学博士学位论灰如发现肿瘤，则测量其最大三维尺寸。随机选取8例食管标本，纵向切取2条各宽约1~的食管组织(如有肿瘤或化生表现，应包含肿瘤或化生组织)于液氮中速冻后冻存于一70oC冰箱，以备行eox一l和eox一2表达的westem Blotting检测以及PGE:含量的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。剩余食管组织标本制成石蜡切片，苏木精一伊红染色后进行病理组织学检查。 l结果1 1.无反流组大鼠食管外观正常，病理组织学检查未见明显病变。模型组大鼠食管中段和下段明显扩张，戮膜显著增厚变硬，呈白色鹅卵石样外观，病理组织学检查呈现典型的反流性食管炎改变。在食管下端可观察到自吻合口向食管侧延伸达3一5~形状不规则的淡红色砧膜区域，其内常有颗粒样乳白色勃膜残留，经病理组织学检查证实这一区域多为化生的Barrert’s勃膜，其内颗粒样乳白色砧膜为残留的鳞状上皮岛。所有观察到的肿瘤均为起源于吻合口食管侧Barrett’s化生区域的食管腺癌，常侵透食管肌层向食管外呈膨胀性生长，但尚未发现侵及临近器官或组织。在吻合口空肠侧的空肠砧膜及肌层完整，未见明显的病理组织学改变。模型组Barrett’S食管和食管腺癌发生率分别为:84%和57%，均显著高于无反流组(p<0.01)。在大鼠正常食管和空肠组织中均未检测到COX一2表达，而在反流性食管炎、B叭ett’s食管和食管腺癌组织中COX一2表达率为1 00%，与正常食管和空肠组织相比有着显著差异(P<0.01)。在反流性食管炎组织中，阳性染色的细胞位于砧膜固有层，散在分布;食管肌层组织呈弥漫性弱阳性染色。在Barrett’s食管组织中，阳性染色位于化生的表面柱状上皮细胞及其下方的豁液腺细胞，分布不均匀:有些区域呈强阳性，有些区域则呈弱阳性，甚至有些区域为阴性;在勃膜固有层中偶见阳性染色的细胞;食管肌层组织亦呈弥漫性弱阳性染色。在食管腺癌组织中，强阳性染色位于无勃液湖形成的聚集成团的癌细胞:在有豁液湖形成的癌细胞中，有些