本研究以从美国进口的高产脂湿地松优良种源的种胚为起始外植体，通过直接器官发生途径研究了高产脂湿地松在组织培养条件下，不定芽的诱导、增殖、伸长、生根以及开放式组培研究。本试验拟通过湿地松组培快繁技术的研究，从而建立高产脂湿地松快速、高效、低成本的繁殖技术体系奠定基础。本研究的主要内容包括：以成熟种胚为材料，进行高产脂湿地松的不定芽诱导、增殖和伸长以及诱导生根等各个环节最佳培养条件的筛选；运用植物形态及解剖学手段，了解其器官发生过程；对湿地松的开放式组培技术进行初步探索，以期达到简化组培流程、降低组培成本的目的。研究结果如下：对外植体的消毒，本试验采用2%NaClO溶液和0.1%HgCl₂溶液联合消毒法，二者的最佳消毒时间组合由L9（32）完全正交试验确定。2%NaClO溶液的消毒时间梯度依次为：5min、10min、15min；0.1%HgCl₂溶液的时间梯度依次为：30s、60s、90s，结果表明，2%NaClO溶液消毒5min，再用0.1%HgCl₂溶液处理时间90s，消毒效果最佳，外植体污染率8%，褐化率控制在18%。不定芽诱导的最佳外植体为完整种胚，去胚根种胚作为外植体的诱导效果与完整种胚相似，但较易形成愈伤组织。不定芽诱导最佳培养条件由L₉（3⁴）正交试验确定，基本培养基类型分别为MS、1/2MS、DCR；6-BA的浓度分别为1.0mg·L^-1、2.0mg·L^-1、4.0mg·L^-1；NAA的浓度分别为0、0.05mg·L^-1、0.01mg·L^-1。最佳培养条件为：MS+2.0mg·L^-16-BA+0.05mg·L^-1NAA，不定芽诱导率可达67.3%。不定芽增殖的培养条件的筛选采用L16（45）正交试验设计，基本培养基类型分别为：MS、1/2MS、WPM、DCR；6-BA：2.0mg·L^-1、2.5mg·L^-1、3.0mg·L^-1、3.5mg·L^-1；NAA：0.025mg·L^-1、0.05mg·L^-1、0.1mg·L^-1、0.15mg·L^-1。结果表明，最优的激素组合为：3.0mg·L^-16-BA+0.05mg·L^-1NAA，平均芽增殖系数达到6.90，且增殖芽较健康。不定芽伸长最适基本培养基为DCR培养基，不添加任何植物激素，添加适量的活性炭有利于芽的伸长，当AC添加量为0.05%时，芽长势最佳。不定芽生根培养条件的确定采用L₉（3⁴）正交试验方法，设计三因素3水平试验，参照无土栽培原理，基本培养基类型依次为：DCR、WPM、PDA；基质类型依次为：琼脂、椰糠、珍珠岩；IBA浓度梯度依次为：0、0.1mg·L^-1、0.5mg·L^-1。结果表明，最佳培养条件为：PDA+0.1mg·L^-1IBA+椰糠，生根情况最好，生根率达到73%，且生根苗易于移栽成活。通过对湿地松培养物的形态及解剖学观察，了解湿地松的器官分化过程。对愈伤组织观察可知，其大致可分两种：器官性愈伤组织、非器官性愈伤组织。非器官性愈伤组织结构松散，颜色偏黄，显微镜下，细胞之间结构松散，未形成器官性结构，不具有器官发生的可能；器官性愈伤组织，细胞结构紧密，显微镜下细胞相对较小，无明显液泡结构，细胞核较大，细胞排列紧密，形成椭圆形类似分生组织的结构，有发育形成芽原基的潜质。通过对芽增殖过程观察可知，芽原基起源于不定芽茎上的表皮层细胞，而与较深层的形成层细胞无关，两者早期并无维管组织联系；根的发生起源于愈伤组织内特定的具有分化能力的细胞，细胞进行分化，形成特定的类似“维管束”的结构，细胞继续分裂，形成芽原基，形成不定根。在高产脂湿地松常规组培成功的基础上，开展湿地松的开放式组培研究，简化生产流程，降低生产成本。研究证明0.8%的NaClO溶液可作为实验器械消毒的有效消毒剂，接种过程持续浸泡，可有效控制污染。对高产脂湿地松开放式组培培养条件的简化筛选试验表明，添加0.01%NaClO溶液代替高压蒸汽灭菌，以市售白砂糖代替蔗糖，且添加量为5g·L^-1可有效控制培养基污染，同时大大减少试验成本。