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目的:观察野菊花总提取物及有效部位总黄酮抗实验性心室重构(VR)的作用及作用机制。
方法:(1)采用三种不同的心室重构动物模型观察野菊花总提取物抗实验性VR的作用:①将50只雄性小鼠随机分为:正常对照组,模型组,美托洛尔0.06 g·kg-1组,野菊花总提取物21 g·kg-1、42g·kg-1组。除正常对照组外,各组连续7d背部皮下注射ISO2 mg.kg-1,造成心室重构模型。正常组连续7d背部皮下注射相同体积的NS。治疗组在给予ISO后灌胃给药;正常组、模型组给予相同体积的NS。连续7d后,取血和心肌组织,测定小鼠心肌肥厚指数和心肌AngII含量。②将50只雄性SD大鼠随机分为:正常对照组,模型组,卡托普利0.04g.kg-1组,野菊花总提取物12.5 g.kg-1、25g.kg-1组。除正常对照组外,各组连续7 d腹腔注射L-Thy0.25 mg.kg-1,造成心室重构模型。正常组连续7d腹腔注射相同体积的NS。治疗组在给予L-Thy后灌胃给药,正常组和模型组给予相同体积的NS。连续9d,取血和心肌,测定大鼠心肌肥厚指数、心肌AngII和血清ALD含量。③以腹主动脉不完全结扎法复制压力超负荷型心室重构模型。将造模成功动物随机分为模型组、卡托普利0.04 g.kg-1组、野菊花总提取物12.5g.kg-1、25g.kg-1组,另以同样步骤复制假手术组。造模后第3d,治疗组灌胃给药,假手术组、模型组给予相同体积的NS,连续5w后,测定大鼠血流动力学参数、心肌肥厚指数、血清ALD、TNF-α、心肌AngII、Hyp和胶原蛋白含量。病理形态学检测:心肌切片HE染色和苦味酸天狼猩红染色,测定心肌细胞横截面积和胶原纤维分布。免疫组织化学法测定心肌PKC和bFGF蛋白表达。(2)采用两种不同的心室重构动物模型观察野菊花总黄酮(TFC)抗实验性VR的作用:①TFC的提取:大孔树脂吸附法;以芦丁为标准品,紫外法测TFC含量。②将50只雄性小鼠随机分为:正常对照组,模型组,美托洛尔0.06 g.kg-1组,TFC0.25g.kg-1、0.5g.kg-1组。具体方法和检测指标同第一部分①实验。③以腹主动脉不完全结扎法复制压力超负荷型心室重构模型。将造模成功动物随机分为模型组、卡托普利0.04 g.kg-1组、TFC0.09g.kg-1、0.18g.kg-1、0.36g.kg-1组,另以同样步骤复制假手术组。造模后第3d,治疗组灌胃给药,假手术组、模型组给予相同体积的NS,连续5w后,测定大鼠血压、心肌肥厚指数、血清TNF-α、心肌AngII、ANP、Hyp含量。病理形态学检测:心肌切片HE染色和苦味酸天狼猩红染色,测定心肌细胞横截面积和胶原纤维分布。免疫组织化学法测定心肌MMP-2、MMP-9蛋白表达,RT-PCR法测定心肌MMP-2、MMP-9 mRNA表达。
结果:(1)野菊花总提取物的实验观察:①野菊花总提取物可显著降低ISO致心室重构小鼠心肌肥厚指数,减少心肌AngII含量。②野菊花总提取物可显著降低L-Thy致心室重构大鼠心肌肥厚指数,降低心肌AngII和血清ALD含量。③野菊花总提取物可显著降低AAB致心室重构大鼠血压和心肌肥厚指数,减少血清ALD、TNF-α、心肌AngII、Hyp和胶原蛋白含量;野菊花总提取物还可显著降低AAB致心室重构大鼠左室心肌细胞横截面积、心肌胶原容积分数和血管周围胶原分数,减少心肌PKC和bFGF蛋白表达。(2)TFC的实验观察:①TFC的得率3.7%,纯度:63%。②TFC可显著降低ISO致心室重构小鼠心肌肥厚指数,减少心肌AngII含量。③TFC可显著降低AAB致心室重构大鼠血压和心肌肥厚指数,减少血清TNF-α,心肌AngII、ANP、Hyp和胶原蛋白含量;TFC还可显著降低AAB致心室重构大鼠左室心肌细胞横截面积、心肌胶原容积分数和血管周围胶原分数,减少I、III胶原纤维含量及分布,降低心肌MMP-2、MMP-9蛋白表达和MMP-2、MMP-9 mRNA表达。
结论:野菊花总提取物具有良好的抗心室重构作用,有效作用部位为总黄酮。其作用机制与降低心脏负荷,抑制过度上调的ALD、AngII、ANP、TNF-α、bFGF等神经内分泌因子,调节PKC信号转导通路和MMP-2、MMP-9等心肌肥厚相关基因、蛋白表达异常有关。