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背景：
目前全球至少20亿人口感染了或感染过HBV，其中慢性HBV感染者约为3.5亿。个体在HBV感染后临床表型复杂多样，可表现为急性肝炎、自限性HBV感染、慢性感染。一定程度上，预后差异受到宿主遗传因素影响，其中单核苷酸多态性(SNP)是其重要的物质基础。肝细胞分泌通路上的Furin酶，参与HBeAg形成，其相应基因fur的启动区存在SNPs。它们可能通过影响Furin酶活性影响HBeAg分泌，并最终影响HBV感染转归。fur基因有三个启动子：P1，P-1A，P1B，在肝细胞中，P1启动子对基因转录起主要作用。前期研究显示：fur P1启动区SNP-229C/T的T等位基因和TT基因型与HBV持续感染有关，进一步研究显示-229TT具较高转录活性，与Nrf2较高结合能力相关，支持Furin酶在HBV感染发生发展中起重要作用，值得进一步研究。
目的：
1.调查南中国健康人fur基因P1启动区-2300bp-+1bp区域SNPs的分布状况，分析各SNP的等位基因、基因型和单体型分布频率，明确有无新的SNP出现。
2.根据SNPs相关结果，进一步分析不同单体型的转录诱导活性在不同条件下的差异，明确SNPs对fur基因表达水平的影响，为阐明Furin在HBV感染发生发展中的作用，以及Furin作为治疗新靶点等深入研究提供理论基础。
材料和方法：
1.通过GeneBank、dbSNP获得fur P1启动区序列及SNPs信息，收集48例健康人(无HBV感染者)全血样本，提取全基因组DNA进行PCR扩增，扩增产物经纯化后直接测序，分析SNPs基因型和频率，寻找新的SNP位点，并构建该区段不同单体型。
2.选取单体型为-2224G1876G229C，-2224G1876T229T样本，PCR扩增纯化2300bp片段克隆到pGL3-basic载体，构建pFur1876G，pFur1876T，pFur-hap-CGC，pFur-hap-GTT，定点突变构建pFur-hap-GGT，pFur-hap-GTC，测序法验证重组体序列的正确性。所构建载体转染至HepG2细胞比较转录活性差异，转染pFur-hapGGC，pFur-hap-GTT至HepG2、LO2、LOVO不同细胞比较转录活性差异是否类似。
3.利用生物信息学网站对P1启动子区-1876G/T位点进行预测分析潜在结合的转录因子，构建相应过表达、RNA干扰真核表达载体，与pFur-hap-GGC，pFur-hap-GTT共转染HepG2细胞，比较对二者转录活性影响差异，转录因子表达情况由定量PCR测定。
4.在HepG2细胞通过TGFβ1、缺氧、H2O2诱导pFur-hap-GGC，pFur-hap-GTT，比较对二者诱导差异。
结果：
1.在fur基因P1启动区2300bp的范围内已登记了16个SNPs。在南中国48例健康人中，P1启动区2300bp范围内主要有三个SNP位点，即-229 C/T、-1876G/T、-2224G/A，均符合Hardy-Weinberg分布，其中-2224G/A在dbSNP尚未见报道。通过HaploView分析，主要单体型为hap-GTT,hap-GGC。
2.成功构建不同片段/单体型报告基因。双荧光报告系统分析表明，在HepG2细胞中，对比pFur1876G，pFur1876T荧光对比值为2.45倍，对比pFur-hap-GGT,pFur-hap-GTC荧光对比值为2.15倍，对比pFur-hap-GTT,pFur-hap-GGC的荧光相对比值在HepG2，LO2，LOVO细胞中分别为约2.00倍，1.29倍，1.57倍。
3.生物信息学显示-1876GG较-1876TT有较强的HNF3β结合能力，并成功构建HNF3β、Nrf2高表达/RNA干扰真核表达载体，共转染试验显示HNF3β、Nrf2对pFur-hap-GTT，pFur-hap-GGC转录活性影响有差异。
4.TGFβ1、缺氧、H2O2对 pFur-hap-GTT，pFur-hap-GGC均可诱导，但pFur-hap-GTT表现出较强可诱导性。
结论：
1.南中国人群fur基因P1启动区上游2300bp主要有3个SNPs。
2.-1876G/T与-229C/T呈完全连锁关系，但影响fur基因P1启动区转录活性机制有差异。
3.fur基因P1启动区不同单体型在不同疾病状态下均可能被诱导为高表达单体型，推测Furin酶能在更多疾病的发生发展中发挥作用，值得进一步关注。