论文部分内容阅读
精氨酸脱亚胺酶（Arginine deiminase;ADI）作为精氨酸降解酶;是一种具有广阔应用前景的抗肿瘤药物;可用于原发性肝癌、黑色素瘤和前列腺癌等疾病的治疗。对正常细胞来说;精氨酸是非必需氨基酸;可以自身合成。而对于某些肿瘤细胞;必须从周围环境中摄取精氨酸来维持自身生长繁殖;因此;ADI通过降解环境中的精氨酸来达到抗肿瘤的目的。ADI作为蛋白质类生物大分子药物;有生物大分子类药物的固有缺点;如：抗胰蛋白酶水解能力差、体内稳定性低、代谢半衰期短等。 环糊精脂质体（Cyclodextrin liposomes）是一种新型的药物载体;它可以对药物起到双重保护作用;提高药物的稳定性;延长药物半衰期;增强药物的生物利用度等。聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯既能提高脂质纳米类药物的生物利用度;也可以发挥协同抗癌效果。因此本研究首次制备了聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯修饰的精氨酸脱亚酶 的 环 糊 精 脂 质 体 （ D-α-tocopherol polyethylene glycol 1000 succinate-modified-cyclodextrin liposomes containing arginine deiminase; ADTHL）;并对ADTHL的理化性质、最适温度、最适pH、体外稳定性、相关机制及体内外动力学进行了初步的研究。 第一部分实验初步考察了ADTHL的理化特性。本文采用逆向蒸发法制备ADTHL;结果表明;制备得到的ADTHL为白色混悬液;透射电镜下观察为圆形或类圆形;分布均匀。用马尔文激光粒度仪测定ADTHL的粒径约为201 nm;Zeta电位约为-16 mV。用葡聚糖凝胶柱分离-考马斯亮蓝法测定包封率约为59%。 第二部分实验考察了ADTHL的最适温度与最适pH。结果表明; ADTHL的最适温度为37℃;最适pH为6.5。将ADI包封于ADTHL后;酶的活性明显提高。 第三部分实验初步考察了ADTHL的体外稳定性。结果表明;与ADI相比;ADTHL的酸碱稳定性、55℃热稳定性、4℃低温放置稳定性、抗胰蛋白酶水解能力和血浆稳定性都明显优于游离ADI。 第四部分实验初步考察了ADTHL活性提高、稳定性增强的机制。本文通过荧光光谱法考察ADTHL活性提高、稳定性增强的机制;结果表明;ADI与B-ADTHL膜有相互作用;这可能增强了酶的活性。将ADI制备成ADTHL后;可减少外界环境对酶的干扰;避免ADI分子的结构被破坏;而稳定性增强。 第五部分实验初步考察了 ADTHL 的体内外动力学。通过Lineweaver-Burk双倒数作图法;求得ADTHL的体外酶学动力学参数;结果表明;ADTHL与底物精氨酸的亲和活力更高。通过测定大鼠血浆中ADTHL的酶活性;结果表明ADTHL可以延长酶在大鼠体内的作用时间;提高酶的生物利用度。