论文部分内容阅读
实验一 脓毒症大鼠急性肾损伤模型制备目的制备一种简单、相对稳定的大鼠脓毒症急性肾损伤模型。方法利用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症大鼠急性肾损伤模型。健康清洁级雄性SD大鼠50只随机分为3组,①正常对照组(n=10)：不做任何处理；②盲肠结扎穿孔组(CLP组,n=20)：参照Rittirsch等的方法进行盲肠结扎穿孔术。③假手术组(sham组,n=20)：除了不进行盲肠结扎穿孔外,其余操作同CLP组。24h后经心脏穿刺留取血检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、肿瘤坏死因子-α(TNF-a).白介素-6(IL-6)水平,取肾组织标本行苏木精-伊红染色,光镜下观察肾组织病理改变,sham组、CLP组各留10只大鼠观察生物学行为变化及24h、48h的死亡率。根据肌酐及肾脏病理改变判断脓毒症大鼠是否出现急性肾损伤。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果sham组大鼠麻醉清醒后,活动正常,大鼠全部存活,CLP组大鼠清醒后活动减少,精神差,24h死亡率为20%,48h死亡率为60%.sham组与正常对照组相比,各指标之间没有显著性差异(P>0.05)；与sham组相比,CLP组大鼠24h时血Cr.BUN.TNF-α.IL.6的表达明显增高(Cr(μmol/L):17.74±1.80比40.96±3.03,BUN(nmol/L):1.35±0.23比2.59±0.28,TNF-α[(ng/L):100.81±7.97比239.30±17.57,IL-6(ng/L):76.35±8.94比161.43±14.76,均P<0.05)。正常对照组与sham组大鼠肾脏组织结构清晰,未见明显病理改变,肾损伤评分无统计学差异(P>0.05)；与sham组比较,CLP组肾组织结构紊乱,可见肾小管上皮细胞肿胀、空泡变性、细胞脱落等变化,损伤程度加重,肾损伤病理评分升高,差异有统计学意义(0.48±0.25比2.83±0.27,P<0.05)结论1.本实验的脓毒症致AKI大鼠模型制备成功。2.通过控制实验动物的品种、年龄及盲肠结扎穿孔术的标准化,可制备简单稳定的脓毒症大鼠急性肾损伤模型。实验二NGAL、KIM-1、TIMP-2对脓毒症大鼠AKI的早期预测价值目的探讨NGAL、KIM-1、TIMP-2对脓毒症大鼠AKI中的早期预测价值。方法健康清洁级雄性SD大鼠108只,随机分为三组,正常对照组(n=12)；脓毒症AKI组(SAKI组,n=48),行盲肠结扎穿孔术；假手术组(sham组,n=48),除了不进行盲肠结扎穿孔外,其余操作同SAKI组。SAKI组、sham组均在制模后设置6h、12h、18h、24h四个时间点,每组每个时间点12只大鼠；各时间点心脏穿刺取血检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平；膀胱穿刺留取尿液,检测尿NGAL、尿KIM-1、尿TIMP-2水平,光镜下观察肾组织病理改变。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD检验,P<0.05为差异有统计学意义；部分数据采用Pearson方法进行相关性分析。结果1.各组肾功能变化比较sham组各时间点血肌酐值、尿素氮值与正常对照组相比无显著性差异(P>0.05); SAKI组术后6h与sham组相比无显著性差异(P>0.05); SAKI组术后12h血肌酐值、尿素氮值明显升高,与sham组相比有显著性差异(P<0.05), SAKI组血肌酐值、尿素氮值于24h达峰值,SCr(μmol/L):41.75±4.12, BUN(nmol/L):2.51 ±0.39,术后12h、18h与24h比较有统计学差异(P<0.05)。2.各组大鼠尿肾损伤标志物的变化比较sham组各时间点尿KIM-1、NGAL、TIMP-2与正常对照组相比,无显著性差异(P>0.05)；SAKI组术后6h尿KIM-1、NGAL、TIMP-2即升高,与sham组相比有显著性差异(均P<0.05)；尿KIM-1术后12h达高峰(130.08±10.53 (ng/L)),术后18h、24h有所下降,仍高于sham组(P<0.05),术后6h、12h、18h、24h与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05)；尿NGAL于CLP术后18h达高峰(2979.21 ±258.91(ng/L)),术后24h有下降趋势,仍高于sham组(P<0.05),术后各时间点与正常对照组比较有显著性差异(均P<0.05)；尿TIMP-2在CLP术后12h、18h、24h继续升高,24h达高峰(2241.59±226.45(ng/L)),术后各时间点与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05)。3.各组大鼠肾脏组织病理改变及肾损伤病理评分sham组和正常对照组大鼠的肾脏组织结构未见明显异常；肾小管上皮细胞未见水肿、空泡变性、坏死、脱落,肾小管内未见管型形成等改变;SAKI组大鼠肾脏组织结构有所改变,可见肾小管上皮细胞肿胀、空泡变性、脱落,肾小管内有管型形成。sham组各时间点肾脏组织损伤评分与正常对照组相比,无显著性差异(P>0.05); SAKI组肾损伤病理评分在术后各时间点均升高,随术后时间延长肾组织损伤程度逐渐加重,与sham组相比有显著性差异(6h：0.38±0.18比1.03±0.17,12h:0.43±0.24比1.77±0.17,18h:0.42±0.22比2.24±0.28,24h:0.47±0.32比2.89±0.20；均P<0.05)。4.尿标志物与肾损伤评分相关性分析尿KIM-1、尿NGAL、尿TIMP-2与大鼠肾损伤病理评分成正相关,相关系数分别为0.638、0.897、0.810,(均P<0.01), SCr、BUN与大鼠肾损伤病理评分相关性分析显示：相关系数分别为0.795、0.638,(均P<0.01)。结论：脓毒症AKI大鼠在CLP术后6h各尿标志物即明显升高,且早于血肌酐、血尿素氮,尿KIM-1、尿NGAL、尿TIMP-2与脓毒症大鼠肾损伤成正相关,对脓毒症AKI有早期预测价值。