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谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)是多功能的II期解毒酶,其催化亲电子底物与谷胱甘肽的连接,在保护生物体免受活性氧物质毒性方面起重要作用。本文从褶纹冠蚌Cristaria plicata克隆了一个alpha级GST(CpGST5)cDNA序列。CpGST5 cDNA的全长为1885 bp,开放阅读框为669 bp,编码222个氨基酸。蛋白结构分析表明CpGST5的成熟肽包括2个典型结构域,保守域GST_N和保守结构域GST_C,N末端含有GSH结合位点(G位点)。C末端中含有底物结合口袋(H位点)的位点。实时定量PCR结果显示在各组织中CpMnSOD mRNA组成型表达。CpGST5基因在肝胰腺中表达量最高,外套膜中表达量最低。在微囊藻毒素刺激后,肝胰腺和血淋巴中CpGST5的表达水平显示出显著增加的趋势。重组CpGST5在大肠杆菌中表达为包涵体形式。锰超氧化物歧化酶(Manganese Superoxide Dismutase,MnSOD)是一种重要的金属酶,催化ROS在生物体内形成无害的分子氧和过氧化氢。本文通过cDNA末端PCR的快速扩增,使用简并引物从褶纹冠蚌血淋巴中克隆了MnSOD cDNA,命名为CpMnSOD(登录号MK465057)。MnSOD cDNA的全长为1096 bp,开放阅读框为672 bp,编码223个氨基酸。推导的氨基酸序列N-末端含有18个氨基酸的线粒体靶向序列(MTS)和锰结合的4个保守氨基酸(H49,H97,D182,H186)。筛选CpMnSOD 5’-侧翼区显示存在几个可能控制MnSOD表达的重要转录因子结合位点。CpMnSOD与其他物种的MnSOD具有较高的序列相似性。实时定量PCR结果显示CpMnSOD mRNA各组织中均有表达。肝胰腺中表达水平最高,其次是闭壳肌,外套膜和鳃,最低表达水平在血淋巴中。在微囊藻毒素刺激后,血淋巴和肝胰腺中CpMnSOD mRNA的表达水平上调。将CpMnSOD的cDNA克隆到质粒pColdI-ZZ中,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。酶稳定性测定表明,纯化的CpMnSOD蛋白在温度高达70℃,pH 2.0-10.0时保持了超过80%的酶活性,并且对8mol/L尿素或8%SDS具有抗性。