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目的:1.观察中药补肾解毒方对猴免疫缺陷病毒(SIV)/人免疫缺陷病毒(HIV)的体外抑制效果;2.探讨HIV-1感染对ITAMs/ITIMs免疫调控信号通路的影响及其作用机制;3.观察HIV-1感染对炎症反应相关细胞因子IL-6、IL-18、TNFa、TRAF-4表达的变化;4.观察中药补肾解毒方对HIV-1感染后ITAMs/ITIMs信号通路关键受体及炎症反应显著变化因子的干预作用。方法:1.采用系统溶剂分离法对中药YYH、GZ、LW的乙醇提取物进行萃取,得到前期初步证实具有抗SIV/HIV活性的YYH L部位、YYH Y部位、GZ S部位、LW S部位,组成中药补肾解毒方;2.采用 SIVmac251 和 BK132 HIV-1 感染 CEMxl74 细胞、BK132 HIV-1 感染 M8166细胞作为实验模型,通过体外药效学实验,采用病毒引起合胞体数量和实时荧光定量RT-PCR法,综合考虑CPE效应、细胞内HIVRNA表达水平和上清中病毒载量等指标,全面评估中药补肾解毒方对SIV/H1V的抑制效果,再以同样评价指标比较补肾解毒方组方药效与组方中各有效部位单独药效;3.以M8166细胞感染BK132 HIV-1病毒为模型,采用RT-PCR法检测ITAMs/ITIMs信号通路相关基因SHP-1、SHP-2、SHIP1、SHIP2、Syk、Zap70的mRNA表达水平,采用免疫印迹Western-blot法检测ITAMs/ITIMs信号通路相关受体(同上)的蛋白表达水平;4.以M8166细胞感染BK132 HIV-1为模型,采用RT-PCR法检测感染前后细胞内相关炎症因子IL-6、IL-18、TNFa、TRAF-4 mRNA的变化;5.以中药补肾解毒方干预由BK132 HIV-1感染的M8166细胞模型,采用RT-PCR法检测干预前后ITAMs/ITIMs通路关键受体和相关炎症因子的mRNA变化,采用Western-blot法检测该通路关键受体的蛋白表达变化。结果:1.显微镜下观察,中药补肾解毒方对174细胞和M8166细胞的最大无毒性浓度均为160 μ g/ml;2.中药补肾解毒方对SIV的抑制作用在20 μg/ml～160 μg/ml之间明显,具有剂量依赖性,且该复方在80 μ g/ml～160 μ g/ml浓度时,效果尤好,与阳性药相当。3.补肾解毒方基于174细胞模型对HIV的抑制作用在20 μ g/ml～160 μ g/ml之间明显,具有剂量依赖性,且该复方在40 μ g/ml～160 μ g/ml浓度时,抑制效果好,与阳性药无异;补肾解毒方基于M8166细胞模型对HIV的抑制作用在10 u g/ml～160 μ g/ml之间明显,具有剂量依赖性,且该复方在40 μ g/ml～160 μ g/ml浓度时,抑制效果好,与阳性药无异。4.在补肾解毒方基于174细胞对SIV/HIV的抑制作用与组方的各有效部位比较实验中,复方效果更优,而基于M8166细胞抗HIV药效与组方各有效部位比较,其表现虽不及在174细胞模型中鲜明突出,复方仍显示较好的效果;5.HIV-1感染M8166细胞后,SHP-1 mRNA表达明显增加,差异有统计学意义(/<0.01),SHIP1 mRNA虽有下降趋势,但差异未见统计学意义(P>0.05),SHP-2、SHIP2、Zap70、Syk mRNA表达均无明显变化(P均>0.05);6.感染前后,M8166细胞内SHP-1和PSHP-1蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P均<0.01),SHIP1蛋白表达明显减少,PSHIP1蛋白表达量明显下调,差异有统计学意义(P均<0.05),Syk总蛋白表达量上调,PSyk蛋白表达减少,但差异无统计学意义(P均>0.05);SHP-2、SHIP2和PSHIP2蛋白均见表达,但无明显变化(P均>0.05),PSHP2、Zap70和PZap70均未见蛋白表达;7.感染前后,M8166细胞内HIV、IL-6、IL-18、TNF-a、TRAF-4 mRNA表达均显著增加,差异具有统计学意义(P均<0.05);8.经中药补肾解毒方干预后,M8166细胞内HIVRNA(P<0.01)、SHP-1 mRNA(P<0.05)、IL-6 mRNA(P<0.05)、IL-18 mRNA(P<0.05)、TNFa mRNA(P<0.01)、TRAF-4 mRNA(P<0.05)均明显下调,差异均具有统计学意义,且补肾解毒方160 μg/ml浓度组干预效果与阳性药对照组相比,下调趋势一致;SHP-1和PSHP-1的蛋白表达也较未干预组低,与阳性药对照组比较则无明显差异。结论:1.由YYH L部位、YYH Y部位、GZ S部位、LW S部位组成的中药补肾解毒方具有显著的抗SIV/HIV作用,且补肾解毒方对SIV/HIV的抑制作用与组方中的各有效部位单独抑制作用比较,复方效果更优,较好地体现了补肾解毒方的协同作用。2.HIV-1感染M8166细胞后,ITAMs/ITIMs信号通路被激活,并可能通过促进SHP-1受体的表达及磷酸化水平发挥作用,相关炎症因子表达的升高则提示HIV感染后炎症反应显著发生,与免疫激活密切相关。3.补肾解毒方对HIV-1感染导致的免疫机制紊乱的干预可能与下调SHP-1表达、改善炎症有关。