利用PCR进行奶牛早期胚胎性别鉴定是目前商业化生产中应用较多的一项性别控制技术。但因为PCR反应的灵敏度很高,所以该技术也极易受到其它因素的影响,导致错误的结果或无结果。本试验对生产中可能影响PCR反应的几个因素进行了分析,结果表明: 1.在PCR反应体系当中,有透明带组和无透明带组其无反应(NR)率分别为4.58%和1.87%,两组之间差异显著(P<0.05),有透明带对PCR反应率有一定的影响。取样时有透明带组其产母犊的准确率(95.65%)与无透明带组(95.56%)之间的差异不显著(P>0.05),细胞取样时有无透明带的黏附对PCR性别鉴定的准确率无显著影响。 2.胚胎质量对产犊准确率有显著影响。产犊准确率随着胚胎质量的下降而提高,1级胚胎(94.85%)与2级胚胎(98.36%)之间差异极显著(P<0.01)。 3.取样量大小显著影响PCR反应率,取样为1～4个细胞组无反应率为4.38%,而取样数大于或等于5个细胞组无反应率为2.12%,两者之间差异显著(P<0.05)。取样量大小同时也影响奶牛胚胎性别鉴定的准确率,取样为1～4个的组产母犊的准确率为88.10%,而取样大于或等于5个细胞组产母犊的准确率为98.47%,二者之间差异极显著(P<0.01)。 4.研究表明:取样细胞为活细胞组的无反应率为3.19%,而取样细胞为散细胞和死细胞的组无反应率为2.19%,活细胞组略高于散细胞死细胞组,但二者之间差异不显著(P>0.05),取样细胞活性对PCR反应率没有显著影响。取样为活细胞组产犊准确率为93.39%,高于取样为散细胞或死细胞组(86.57%),二者之间差异显著(P<0.05)。即:取样细胞活性对胚胎性别鉴定的准确率有显著影响。 5.本试验中将胚胎分为4个发育阶段(桑椹胚、早期囊胚、囊胚和扩张囊胚)和3个质量等级(1—优良,2—普通,3—可用),得到1258枚已知性别胚胎,其中625枚雌性胚胎,633枚雄性胚胎,性别比率(雌性:雄性)为1:1.012。经卡方检验雌雄比符合1:1的理论比率(P>0.05)。