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第一部分MiR-93在不同预后肺腺癌患者恶性胸腔积液中表达水平研究目的通过恶性胸腔积液标本miRNA芯片分析,筛选与恶性胸腔积液预后相关的miRNA。进一步扩大样本量,通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)进行验证。探究与恶性胸腔积液治疗疗效相关的miRNA。方法采用miRNA芯片技术,筛选10例肺腺癌患者恶性胸腔积液表达谱。结合临床预后分析可能相关的miRNA。扩大样本量验证实验,通过实时定量PCR,在84例临床标本中进行检测,结合临床预后分析确认表达差异的miRNA。结果在预后差异的两组,预后好无进展生存期(Progression Free Survival,PFS)≥5M,预后差组PFS≤2M),通过miRNA芯片共检测出113个表达差异miRNAs,明确33种miRNAs在两组患者中表达水平差异大于2倍。选取10个miRNA通过实时定量PCR在84例胸腔积液患者中进行验证,确认miR-93和miR-146a的表达在两组差异有统计学意义。结论利用miRNA芯片和PCR技术明确miRNA-93和miRNA-146a在预后较好的恶性胸腔积液中高表达,可能发挥抑制胸腔积液的作用。第二部分MiR-93靶向调控Angiopoietin2/Tie2轴在恶性胸腔积液形成中的作用目的研究在人淋巴管内皮细胞和人脐静脉内皮细胞中干预miR-93表达后,细胞生物学功能的变化。并通过在线数据库预测调控靶基因。方法通过构建细胞miRNA转染模型,进行Transwell细胞迁移实验、CCK8法和平板克隆实验检测细胞增殖能力、细胞成管实验、细胞周期和凋亡等细胞生物学功能。通过在线数据库预测靶基因和结合位点,荧光素酶报告基因实验预测和验证结合位点的结合能力,蛋白免疫印迹检测靶基因蛋白水平表达变化。结果通过转染miRNA mimics干预miR-93表达,成功构建细胞模型。MiR-93的高表达对人淋巴管内皮细胞(human lymphatic endothelial cells,HLEC)和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)两种细胞系的迁移、增殖、成管等功能均产生抑制作用,促进细胞凋亡,并阻滞细胞于G1期。预测发现miR-93可能作用于血管生成素2(Angiopoietin2,Ang2)mRNA终止密码的第1933位,通过荧光素酶报告基因实验,证实了miR-93具备调控Ang2/酪氨酸激酶受体2(tyrosine kinase receptor 2,Tie2)轴的分子基础。在蛋白水平,高表达miR-93抑制了HLEC和HUrVEC两种细胞系Ang2的表达水平。结论研究发现miR-93可能通过调控Ang2/Tie2,参与对内皮细胞的迁移、增殖、成管和细胞周期等调控作用;并通过调节新生血管和新生淋巴管,发挥抑制胸腔积液的作用。