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目的:①探索简便、高效的方法获得富血小板血浆(platelet-ich plasma,PRP)并观察人脂肪干细胞成骨矿化细胞分化过程中PRP的作用,及其与支架材料纳米羟基磷灰石/胶原生物相容性的实验研究。②观察釉基质蛋白(eamel matrix proteins, EMPs)对Beagle犬脂肪干细胞增殖的影响,探索EMPs促进脂肪干细胞增殖作用的最佳浓度。方法:①抽取三名健康成人静脉血各40ml,分别用二次离心法和三次离心法制备PRP,进行血小板计数分析,并进行相关系数分析。酶消化法获得人脂肪干细胞,取生长状态良好的第3代人脂肪干细胞分别培养在含100ml/L FBS的DMEM培养液、成骨细胞诱导液和添加PRP的成骨细胞诱导液中,通过Von Kossa染色观察60ul/mLPRP对人脂肪干细胞向成骨细胞分化的影响;并将人脂肪干细胞与纳米羟基磷灰石/胶原复合培养7天后,环境扫描电镜观察人脂肪干细胞在支架材料上附着增殖情况。②提取猪EMPs并SDS-PAGE结果鉴定,分别用含400 mg/L、200 mg/L、100 mg/L、50 mg/L EMPs作用于体外培养Beagle犬脂肪干细胞,分别作用48h、72h、96h后,用MTT法检测细胞增殖状况。用SPSS10.0软件包中的方差分析和配对t检验进行统计学分析。结果:①三次离心法制备的PRP中血小板的数量、血小板富集系数、血小板获得率明显高于二次离心法的PRP,证明三次离心法制备的PRP效率高。酶消化法能成功获得人脂肪干细胞,在PRP的作用下,脂肪干细胞能够更加有效的向成骨细胞分化,形成更多的钙化结节,结节细小致密。环境扫描电镜观察,脂肪干细胞在支架上充分的附着伸展,细胞在材料表面伸展、粘附。②在接种培养后从48h开始, 50mg/L和100mg/L EMPs组与对照组相比差异即有显著性,其余各组与对照组间无显著差异;48h~96h,100 mg/L EMPs组的促增殖效应最明显。结论:①改良三次法制备的PRP的效率高于传统二次法。人脂肪干细胞的成功分离诱导分化,为牙周组织工程提供了新的种子细胞来源,PRP是促进该细胞成骨细胞分化的有效的细胞因子组合,纳米羟基磷灰石/胶原可以作为牙周组织工程的支架材料。②EMPs对脂肪干细胞有增殖作用,以100 mg/L组的促增殖作用最强,并在作用的48h即可明显促进细胞增殖。