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目的:观察不同浓度染料木素对人胰腺癌细胞株PANC-1作用及其抑癌基因表达的的研究,从而为临床治疗胰腺癌提供新的思路方法。方法:本实验共分实验组(80,120,160,200μmol/L)的染料木素、空白对照组(PBS)和标准对照(吉西他滨)。各组培养基处理细胞12h、24h、36h、48h、60h后,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测人胰腺癌细胞株PANC-1在染料木素作用下的增殖活性;流式细胞术检测人胰腺癌细胞株PANC-1在染料木素木素作用下的凋亡细胞百分率;用逆转录-聚合酶连反应(RT-PCR)方法测定P53及P21抑癌基因的表达;Western blot法检测抑癌基因P53和P21的蛋白表达水平。实验结果统计学分析:细胞凋亡与细胞基因m RNA采用的是LSD法,细胞增殖数据采用的是配对t检验,P<0.05比较差异有统计学意思。结果:1.CCK-8法检测染料木素对胰腺癌细胞(PANC-1)的生长抑制作用分别对160μmol/L与200μmol/L、120μmol/L与200μmol/L、160μmol/L与GEM组、200μmol/L与GEM组通过SPSS 13.0进行配对样本t检验,结果显示160μmol/L对GEM组无统计学差异(P=0.067),而其余三组P值均小于0.05;针对36h以内的数据,统计发现120μmol/L对GEM组P值亦小于0.05,而200μmol/L与GEM组无统计学差异(P=0.051)。根据以上结果,我们认为染料木素总体呈浓度依赖性和时间依赖性,其中36h内200μmol/L效果与GEM组较为接近,但160μmol/L总体效果最好,且与GEM组最为接近。2.流式细胞仪(FCM)各组凋亡指数比较FCM结果可以看出,4个染料木素分组中,80μmol/L对细胞增殖抑制效果并不明显,而120μmol/L和160μmol/L最接近GEM组的效果,200μmol/L晚期凋亡细胞占大部分。可见染料木素的作用有明显的浓度依赖性。3.Western bloting检测P53、P21等相关蛋白表达Western-blot检测蛋白水平显示160μmol/L和200μmol/L染料木素相对于空白对照能够明显的增强抑癌基因P21和P53的蛋白水平的表达,相对于标准组没有明显的差异。结论:1.通过FCM和CCK-8法表明染料木素作用具有浓度依赖性和时间依赖性,但是在低浓度时,染料木素的作用并不理想,而当浓度达到160μmol/L以上时其FCM结果与标准对照组吉西他滨非常接近,浓度达到200μmol/L时晚期凋亡细胞已占60%以上2.CCK-8法细胞增殖的结果显示160μmol/L的抑制效果在48h达到最佳,整体效果最好且曲线与标准对照相近,而Western-blot结果显示染料木素对P21、P53蛋白均有明显上调作用,浓度依赖性小。3.我们推断浓度为160μmol/L染料木素对胰腺癌细胞株PANC-1的抑制作用最佳,其可能通过下调细胞增殖、细胞周期相关基因以及上调P21、P53蛋白表达,使染料木素对胰腺癌细胞株PANC-1体外增殖的抑制作用表现出浓度及时间依赖性,从而发挥抑制癌细胞作用。