【摘 要】
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非洲菊(Gerbera jumesionii Bolus)是世界上有名的园艺切花品种.也是云南的主栽品种,根腐病、萎焉病是非洲菊的主要病害,严重影响了非洲菊的产量和质量.转基因技术为我们解决
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非洲菊(Gerbera jumesionii Bolus)是世界上有名的园艺切花品种.也是云南的主栽品种,根腐病、萎焉病是非洲菊的主要病害,严重影响了非洲菊的产量和质量.转基因技术为我们解决这些问题提供了一种新的研究手段.SAP1是一个抗细菌和真菌的广效性抗病基因,SFL是一个抗病毒基因(兼抗真菌),通过农杆菌介导,将这两个抗病基因导入非洲菊,有望培育出抗病种质或品种. 该实验构建了广谱抗细菌、真菌的pBI121/SAP1和抗病毒的pBI121/SFL基因表达载体,应用农杆菌介导的愈伤组织法进行非洲菊转化研究,通过愈伤组织侵染、筛选、再分化获得了转基因植株,建立了一套有效的非洲菊遗传转化体系.通过对云南主要非洲菊感病品种的基因转化研究,摸索出了适合于非洲菊基因转化条件:(1)取叶柄基部能快速诱导愈伤组织;(2)不同基因型、同一基因型的不同组织器官对农杆菌的敏感性不同,大量转化前应先做GUS体系摸索,减少盲目性;(3)农杆菌侵染浓度应在对数生长期OD<,600>≈0.6时离心稀释15-20倍侵染,侵染时间为30min;(4)共培养时间4-5d;(5)以MS+6-BA 10mg/L+NAA 0.5mg/L作为愈伤诱导培养基,MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.1mg/L作为分化培养基,MS+6-BA0.6mg/L+NAA 0.1mg/L作为增殖培养基,MS+NAA 0.1mg/L为生根培养基.实验通过对转化条件的优化,发现以下措施可以提高非洲菊的转化率:(1)先诱导愈伤再侵染比用叶柄直接侵染的转化率要更高;(2)共培养时间不少于3天;(3)菌液离心重悬于1/2MS培养基,稀释为原来的15-20倍;(4)筛选剂卡那霉素的浓度应从高到低进行筛选. 该实验用R2材料的愈伤组织做转化受体,通过农杆菌介导,把SAP1和SFL基因导入非洲菊,获得了150株转化植株,PCR检测80株,共有14株PCR检测为阳性.其中SAP1检测了35株,3株为阳性,转化率为5％;SFL检测了45株,11株为阳性,转化率达11%.
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