塑化剂BBP是一种环境雌激素,进入机体后能够模拟或干扰机体内天然雌激素的合成、分泌、转运、结合和排泄等生理功能,影响机体正常生理过程,尤其损伤雄性生殖系统,已经成为新的全球性环境污染物之一。但BBP是双酯类化合物,容易水解,动物实验比较染毒及未染毒小鼠的尿液样品,发现其中不含有BBP原形,而是其代谢产物邻苯二甲酸(PA)、邻苯二甲酸单丁酯(MBuP)、邻苯二甲酸苄酯、马尿酸(HA)、邻苯二甲酸单丁酯葡萄糖醛酸结合物及邻苯二甲酸苄酯葡萄糖醛酸结合物,并且其中MBuP具有较高的脂水分配系数,容易透过血睾屏障到达精管腔内引发睾丸毒性,所以国内外一些学者认为,BBP的生殖毒性极有可能是它的代谢产物引起的,但相关研究却很少。故本课题即研究比较BBP及几种代谢产物中哪个具有较强的抗雄激素活性,对雄性生殖系统造成损伤。本课题选取睾丸支持细胞为研究对象,比较塑化剂BBP及其代谢产物(MBuP、PA、HA)的细胞毒性作用。因为睾丸是雄性哺乳动物的主要生殖器官,而支持细胞作为睾丸的特征细胞之一,在睾丸乃至整个雄性生殖系统中具有重要作用,任何损伤睾丸支持细胞的物质都将会产生雄性生殖毒性。本实验采用胶原酶、胰酶双酶消化法,分离提取小鼠睾丸支持细胞,并用油红O染色法、HE染色法以及波形蛋白免疫化学法鉴定分离所得的细胞；然后通过MTT法比较塑化剂BBP及其代谢产物对支持细胞增殖的影响；流式细胞仪检测塑化剂BBP及其代谢产物对支持细胞周期的影响；采用Western Blot法检测塑化剂BBP及其代谢产物对支持细胞内ABP蛋白及波形蛋白表达情况的影响。油红O染色法、HE染色法及波形蛋白免疫化学法鉴定发现所提取的睾丸支持细胞纯度可达80%以上。MTT结果显示,BBP (1.0×10-7,1.0×10-5,1.25×10-4molL)与低剂量的HA (1.0×10-6mol/L)可显著地促进睾丸支持细胞增殖,而MBuP (1.0×10-6,1.0×10-5,1.0×10-4mol/L)、PA (1.0×10-6,1.0×10-5,1.0×10-4mol/L)及中高剂量的HA(1.0×10-5,1.0×10-4mol/L)则会抑制支持细胞的增殖；流式细胞仪结果显示BBP(1×10-7mol/L)及HA (1×10-6mol/L)可显著增加S期、G2期细胞含量,随染毒时间延长,增殖明显,而MBuP (1×10-6mol/L)和PA (1×10-6mol/L)则会明显降低S期细胞比例,随染毒时间的延长,抑制作用明显；Western Blot法结果显示,MBuP (1×10-6mol/L)和PA (1×10-6mol/L)可明显降低ABP蛋白表达量,而BBP (1×10-7mol/L)、MBuP (1×10-6mol/L)和PA(1×10-6mol/L)可显著降低波形蛋白的表达量,与阴性对照比差异具有显著性(p<0.01)。故推测代谢产物MBuP和PA具有较强的抗雄激素活性,在不同程度上抑制支持细胞增殖,影响支持细胞的正常周期分布,影响睾丸支持细胞内部分蛋白的表达和分布,破坏支持细胞的正常生理功能及细胞骨架系统,损伤小鼠睾丸器官,引发雄性生殖发育毒性。