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第一部分萝卜硫素影响LATS2-Rad51通路抑制DNA修复增强宫颈癌放疗敏感性研究背景及目的:宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,在发展中国家是女性癌症死亡的主要原因,且近年来呈现年轻化趋势。放疗是中晚期宫颈鳞癌的主要治疗方式,敏感性不高仍然是宫颈癌治疗的最大障碍。萝卜硫素通过调控癌细胞多种酶体系,促使细胞周期阻滞,癌细胞走向凋亡,并且抑制肿瘤血管形成和抑制癌细胞转移扩散,但就其抗癌机理来说尚无定论。目前已有研究表明萝卜硫素增强肿瘤细胞放疗敏感性,而其作用机制有待于进一步研究。因此,本文就萝卜硫素增强宫颈癌肿瘤细胞放疗敏感性可能的作用机制进行探索。研究方法:用CCK-8体外实验方法检测萝卜硫素(SFN)对宫颈癌细胞Si Ha,He La和C33A生长抑制作用;通过细胞m RNA测序的方法筛选出LATS2作为SFN作用宫颈癌细胞的靶基因,采用Western blot、q RT-PCR的方法验证;分别对Si Ha和C33A细胞进行加或不加SFN,对细胞进行转染LATS2过表达和空白质粒,采用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,采用Western blot方法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及cleaved-par的表达水平。在对两种宫颈癌细胞进行过表达LAST2、干扰LATS2以及SFN加干扰LATS2的处理后,进行电离辐射,克隆形成法观察宫颈癌细胞克隆能力及增殖情况,免疫荧光及Western blot方法检测γ-H2AX,MDC1和Rad51在细胞中的表达情况。研究结果:1、SFN抑制宫颈癌细胞的增殖,宫颈癌细胞受到SFN刺激后LATS2的表达上调;2、LATS2抑制宫颈癌细胞增殖,SFN和LATS2均促进宫颈癌Si Ha和C33A凋亡;3、宫颈癌细胞放疗后,SFN通过促进DNA双链断裂—γ-H2AX的表达增高,并且抑制MDC1和Rad51在细胞核中的聚集;4、宫颈癌细胞放疗后,相比于对照组,过表达LATS2后,γ-H2AX的表达无明显改变,MDC1和Rad51在细胞核中的聚集弱于对照组,而在si LATS2细胞中强于对照组。研究结论:本实验研究验证了SFN抑制宫颈癌细胞的增殖生长,首次揭示了SFN诱导宫颈癌细胞中LATS2的表达,且LATS2抑制宫颈癌细胞增殖、也促进其凋亡;放疗后LATS2通过抑制MDC1和Rad51在DNA双链断裂处的聚集,为SFN影响LATS2的表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的机制研究提供实验依据。第二部分萝卜硫素诱导RASD1的表达促进宫颈癌He La细胞凋亡及周期阻滞的机制研究研究背景及目的:宫颈癌是妇科三大恶性肿瘤之一,近年来呈现年轻化趋势,在发展中国家是女性癌症死亡的主要原因。已有研究发现萝卜硫素(SFN)通过在细胞不同阶段,通过细胞多种酶体系代谢,调控肿瘤细胞周期阻滞,对氧化应激的反应以及细胞凋亡,但就其抗癌机理来说尚无定论。已有研究发现RASD 1在肿瘤细胞中具有诱导细胞周期阻滞,抑制细胞生长,且抑制细胞迁移和侵袭作用。前期实验我们发现SFN能够促进RASD1的表达,因此,本文以宫颈癌He La细胞为体外研究对象,探讨SFN诱导RASD1对宫颈癌细胞凋亡及周期的影响及其可能的作用机制。研究方法:不同浓度的萝卜硫素(SFN)作用于He La细胞48h,采用CCK-8法检测SFN对He La细胞增殖的影响;采用RT-PCR法检测SFN对RASD1基因m RNA表达水平的影响;采用Western blot法检测SFN对RASD1蛋白表达水平的影响;采用流式细胞技术检测加SFN以及过表达RASD1对He La细胞凋亡及周期的影响,采用Western blot检测He La中cleaved-caspase3和cleaved-parp相关凋亡蛋白以及p21和cdc2周期相关蛋白的影响。结论:在宫颈癌He La细胞中RASD1作为SFN的作用靶点,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。研究结果:1.SFN抑制宫颈癌细胞增殖,且SFN作用后RASD1的m RNA和蛋白表达水平明显高于对照组2.加SFN或是过表达RASD1细胞组凋亡率增高,且细胞经过SFN或过表达RASD1处理后cleaved-caspase3以及cleaved-parp蛋白水平升高3.细胞经过SFN或过表达RASD1处理后,细胞S期显著低于对照组,G2/M期细胞增多,同时p21蛋白的表达水平增高,而cdc2蛋白表达降低。研究结论:本实验研究验证了SFN抑制宫颈癌He La细胞的增殖生长,首次揭示了SFN诱导宫颈癌细胞中RASD1的表达,且RASD1促进细胞凋亡及周期阻滞,为SFN促进细胞凋亡诱导细胞阻滞,可能是与RASD1表达增高,促进细胞凋亡及周期阻滞有关,为SFN治疗宫颈癌提供实验依据。